A mer receptor tirozin kináz aberráns expressziója hozzájárul a leukemogenezishez

aberráns

  • Tárgyak
  • Összegzés
  • Bevezetés
  • Eredmények
  • Mer eltérően jelenik meg AML-ben
  • A Mer aktiválja a sejtek túlélését és az anti-apoptotikus utakat
  • Mer gátlás Mer shRNS leütéssel
  • A Mer gátlása shRNS alkalmazásával csökkenti a p38, ERK és CREB foszforilációját
  • A Mer gátlása myeloblast apoptózist indukál in vitro
  • A mer gátlás csökkenti a myeloblast proliferációt in vitro
  • A Mer újbóli bevezetése megmenti a mieloblasztok azon képességét, hogy elkerüljék az apoptózist és telepeket képezzenek
  • A mer gátlás növeli a leukémiamentes túlélést in vivo
  • Vita
  • Kiegészítő információk
  • Képfájlok
  • Kiegészítő ábra S1
  • Word dokumentumok
  • Kiegészítő S1 táblázat
  • Kiegészítő táblázat S2
  • Kiegészítő táblázat S3
  • Kiegészítő ábrák és táblázatok

Tárgyak

  • AML
  • Onkogén fehérjék
  • Onkogenezis
  • A cikk hibajavítását 2016. szeptember 5-én tették közzé.

Összegzés

Az AML-ben végzett legújabb kutatások csak néhány rendellenesen expresszált vagy mutált fehérje-kinázt tártak fel, amelyek potenciális terápiás célként szolgálnak. Az FLT-3 belső tandem duplikációs mutáció magas allélaránya rossz prognózissal társult, és kifejlesztettek kis molekulájú inhibitorokat, amelyek az FLT-3-at expresszáló sejteket célozták meg. A 6,7 pozitív AML C-Kit, amelyet számos visszaeső páciensnél találtak, rossz prognózissal jár, és kis molekulájú inhibitorok is megcélozták. 8,9 Célzottabb terápiás lehetőségekre van szükség az AML hatékonyabb kezeléséhez vagy a nagy intenzitású kemoterápia csökkenésének lehetővé tételéhez.

Ebben a kéziratban arról számolunk be, hogy a Mer a gyermekek és felnőtt AML betegek legtöbb mintájában aberránsan túlexpresszálódik, összehasonlítva a normál mieloid progenitorokkal. A mer az AML sejtvonalak túlnyomó többségében expresszálódik. A Mer aktiválása az AML sejtvonalakban túlélési és proliferációs szignálokat eredményezett, ideértve az ERK1/2 és az AKT, valamint a p38 MAPK (p38), MSK1, CREB, ATF1 és STAT6 foszforilezését. Végül megmutatjuk, hogy a Mer gátlása az RNS-interferencia révén az emberi AML sejtvonalakban az apoptózis jelentős növekedéséhez, a kolóniák kialakulásának csökkenő képességéhez és a leukémia kialakulásának késleltetéséhez vezet immunhiányos egerekben. A terápiásan célzott aberrált Mer expresszió az AML-ben vonzó, potenciálisan jobb eredményeket tesz lehetővé magas kockázatú betegeknél, csökkentett intenzitású kombinált terápiát alacsony kockázatú betegeknél, vagy terápiás lehetőséget azok számára, akik nem tolerálják a magas kockázatú kemoterápiát.

Eredmények

Mer eltérően jelenik meg AML-ben

A Mer AML-ben való expressziójának értékeléséhez 14 különböző myeloid sejtvonalat értékeltünk. A Mer-t immunoblotolással detektáltuk az elemzett sejtvonalak többségében 150-180 kD fehérjeként (a méretváltozást a differenciál glikozilációnak tulajdonították 18). Az áramlási citometriás elemzés megerősítette a megállapításokat; a Mer szempontjából pozitív sejtek nagyobb fluoreszcencia intenzitást mutattak, mint az egér immunglobulin G1 izotípus kontrolljával festett sejtek, míg a negatív sejtek nem (1. ábra és az S1 kiegészítő táblázat). Elemzésünk nagyfokú korrelációt tárt fel az immunoblot és az áramlási citometriás eredmények között, és azt jelezte, hogy az AML sejtvonalak 86% -ában (14-ből 12-ben) volt bizonyos mértékű Mer-expresszió. Ebben a sejtvonal-elemzésben a Mer-expresszió nem társult semmiféle francia-amerikai-brit (FAB) vagy az Egészségügyi Világszervezet (WHO) osztályozásához, citogenetikai rendellenességéhez, annak a betegnek az életkorához, amelyből a sejtvonal származik, és nem volt összefüggésben sem Egyéb ismert klinikai jellemzők (S1 kiegészítő táblázat).

A Mer AML sejtvonalakban expresszálódik. ( nak nek ) Az AML-sejtvonalakból származó teljes sejt-lizátumokat immunblot-analízisnek vetjük alá anti-Mer antitesttel. Ez a reprezentatív blot a Mer fehérje (150-180 kD) kimutatását mutatja több AML sejtvonalban. Az aktint terhelés-kontrollként detektálták. ( ) A sejtek felületén a mer expresszióját áramlási citometriával határoztuk meg, miután primer anti-humán Mer antitesttel és PE-konjugált szekunder antitesttel festettük (szürke hisztogram). A nem specifikus festést IgG1 izotípus kontroll primer antitest és PE-konjugált szekunder antitest (fehér hisztogram) segítségével határoztuk meg. A reprezentatív Mer negatív (HL-60) és Mer pozitív (KG-1) sejtvonalakat mutatjuk be.

Teljes méretű kép

A Mer az AML-betegekből származó legtöbb diagnosztikus csontvelőmintában expresszálódik, normál csontvelőben azonban nem. Az AML-betegek diagnózisában összegyűjtött mieloblasztokat áramlási citometriával elemeztük a Mer expressziójára. ( nak nek ) A humán CD33 és CD45 sejteket expresszáló sejteket elemeztük, miután egér anti-humán Mer antitesttel és PE ​​konjugált másodlagos antitesttel festettük a Mer expressziót (szürke hisztogram). A nem specifikus festődést egér IgG1 izotípus kontroll antitest és PE-konjugált szekunder antitest (vak hisztogram) alkalmazásával határoztuk meg. A reprezentatív áramlási citometriás profilok Mer-pozitív (> 20% pozitív sejtek), Mer-dim (10-20% pozitív sejtek) és Mer-negatív (