Zebrafish (Danio rerio) laboratórium rendszeres gondozása és karbantartása Bevezetési protokoll

Összegzés

Ez a protokoll rendszeres karbantartást és gondozást ír le a zebrafish tenyésztésének optimális körülményeinek fenntartása érdekében. A videó bemutatja a zebrafish lárvák rendszerfenntartásának, elhelyezésének, etetésének, szaporodásának és nevelésének protokollját.

Absztrakt

Jegyzőkönyv

1. Karbantartási rendszer

    A zebrafish-t olyan keringési rendszerben tartják, amely folyamatosan szűri és szellőzteti a vízrendszert az egészséges vízi környezethez szükséges vízminőség fenntartása érdekében. A keringési rendszer segíti a felesleges étel- és halürülék szűrését is. A zebrafish-rendszereket különböző vállalatok kínálják, de laboratóriumunkban az USA vízi élőhely-rendszereit használjuk. A környezeti hőmérsékletet vagy a tartály hőmérsékletét általában 26 és 28,5 ° C között tartják, a megvilágítási viszonyok pedig 14: 10 óra (világos: sötét). A vízi élőhelyek zebrakos rendszere (pl. Asztali rendszer) Költségek

110 mJ/cm 2 a lámpa élettartamának kezdetén, és az adagolási sebesség idővel csökken, ami szükségessé teszi a léggömb cseréjét akkor is, ha még működőképesnek tűnik.

48 óra.
Megjegyzés: Meg kell jegyezni, hogy a dúsítatlan sós sós rák a kikelés után óránként elveszíti tápértékét. Ezért célszerű lehet 24 órán át kelni, vagy 48 óránál hosszabb ideig dúsítani, hogy a sós rákban maximális tápértéket érjünk el.

  • A kikelő rendszerből származó szennyvizet hozzáadják a karantén hulladékához, fehérítővel fertőtleníteni és később ártalmatlanítani.
  • A sós rák gyűjtéséhez távolítsa el a légcsövet, és hagyja, hogy a tenyészet 4-5 percig, de legfeljebb 10 percig ülepedjen. A kikelt sós rák a Hatcher alján gyűlik össze.
    1. Gyűjtse össze a garnélarák sóoldatát az inkubátor alján található csap segítségével. Dobja ki a kezdeti áramlást, amely kikeletlen sós sós garnélarák tojásokból áll.
    2. A meg nem született sós rák eldobása után gyűjtsük össze a kikelt sós rákot, amelyet a zebrafish táplálékául fognak használni.
    3. A sós garnélarákot a sós vízből sós sós garnélagyűjtő hálóval (

      4. Lárva nevelés

        A megtermékenyített petesejteket inkubátorban tartottuk (

      28,5 ° C) 72 órán át, amíg a lárvák kikelnek. Ők most a szabadon úszó korionlárvák, amelyek készen állnak arra, hogy átkerüljenek egy fő haltartályba. A lárvákat a megtermékenyítés után 5 nappal kell etetni (dpf), és az embriók közepén (a 3., 10. részben ismertetett összetétel) vagy a vízrendszerben kell tartani. A lárvák kerek tányérokban tarthatók

      A benne lévő víz legalább 50% -a naponta változik. A vízcserének ki kell terjednie az elhalt vagy beteg lárvák és minden más törmelék eltávolítására.

    4. Helyezze a lárvákat óvatosan egy kis méretű teret (kb. 300-400 mikron) tartalmazó tartályba. Az elhalt és beteg lárvákat el kell távolítani, és naponta néhány milliliter vizet kell hozzáadni.
    5. 14 nap elteltével a lárvatartályokat be lehet iktatni a rendszerbe, és egy kis ciklikus vízárammal (1-2 csepp másodpercenként) lehet ellátni. A lárvák növekedésével a víz áramlása növelhető. Különböző méretű terelőlemezek használhatók a lárvák méretétől függően (pl. Terelőlemez méret 300–400, 500, 700–750 és 1000 mikron), és felnőtt halakhoz normál műanyag terelőlemezt kell használni.
    6. Általában 3 hónapba telik, amíg az embriók ivarérett felnőttekké fejlődnek.

    Reprezentatív eredmények

    Számos kritikus probléma, amely egy zebrafish laboratóriumban előfordulhat, magában foglalja a házrendszer egyes/összes tartályainak vízellátásának elzáródását, a rossz vízminőséget és a szivárgást a keringési rendszer csöveiben vagy tartályaiban. Továbbá aggodalomra adhat okot a fiasítási embriók megszerzésével kapcsolatos problémák. A problémák elhárítását az alábbiakban tárgyaljuk.