AZ OXIDATÍV STRESSZ ÁLLAMA A FÉRFI egerekben végzett kísérleti zsíros májban

Forrás: Az Universidad Centroccidental "Lisandro Alvarado" (UCLA, Venezuela) tudományos, humanista és technológiai fejlesztési tanácsa

végzett

Kedvezményezett: Aura Amйrica Lуpez-Ortega, Ysabel Cristina Mбrquez-Alvarado, Aleidy Josefina Aranguren-Parra, Miguel Бngel Plaza-Carriуn és Marna Divina Murillo Lуpez de Silanes

Kulcsszavak: Zsírmáj, etionin, oxidatív stressz, diszfunkció.

Kivonat: Az állatgyógyászatban az oxidatív stressz (OS) szerepe az állattenyésztésben és a szaporodásban fontossá vált mind a két funkció megváltozása miatt hepatosteatosisos vagy zsírmájú (FL) állatokban. Ennek a vizsgálatnak a célja annak meghatározása volt, hogy megállapították-e a máj OS állapotát az etionin által okozott kísérleti FL-ben felnőtt hím egerek NMRI-jében, és hogy a máj működése megváltozott-e. Két 10 állatból álló csoportot alkalmaztunk: az egyik kontrollt, a másikat intraperitoneálisan DL-etioninnal kezeltük 7,5 mg/20 g testtömeg mellett. Az FL nagyságát és jellemzőit szövettanilag határoztuk meg, és a májzsír-raktár mennyiségét a trigliceridek koncentrációjával határoztuk meg. Mindkét elemzés megerősítette a hepatosteatosis kialakulását DL-etioninnal injektált férfiaknál. A lipoperoxidatív lebomlásból származó termékeket (konjugált diének (CD) és a malondialdehid (MDA), a sejtes OS mutatói) spektrofotometriásan kvantifikáltuk a máj homogenátumban való koncentrációjával. A májfunkció károsodását az alanin-aminotranszferáz (ALT) és az aszpartát-aminotranszferáz ( Az FL indukciója a CD szignifikáns növekedését okozta 231,18 ± 15,53 µmol/mg fehérjéről 297,45 ± 23,10 mmol/mg fehérjére (P

Kulcsszavak: Zsírmáj, etionin, oxidatív stressz, diszfunkció.

Az oxidatív stressz (OE) részt vesz a gyulladásos folyamatokban, valamint a májbetegségekben, a reaktív O2-fajok (ROS) magas koncentrációjáról számolnak be [18], a májkárosodás eredete pedig a szabad gyökök (RL) létezéséhez kapcsolódik. lipoperoxidálhatja a sejtkomponenseket, például a membránokat, és olyan változásokat okozhat, amelyek a sejtműködés elvesztéséhez vezetnek. A NAFLD-ben a máj működését befolyásolja, amint azt kísérletileg meghatározták [13]. Jelen vizsgálat célja annak meghatározása volt, hogy az etionin által okozott kísérleti HG-ben laboratóriumi albínó egerekben (Mus musculus Linnaeus, 1758) felnőtt hím NMRI-ben létrejött-e az EO állapota a májban, valamint számszerűsíteni az esetleges változásokat az említett szerv funkciója.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Ehhez a tanulmányhoz hím egereket használtak a laboratóriumi albínó egerek populációjából, különösen az NMRI törzsből, a Venezuelai Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado (UCLA) központi állattartó létesítményéből. Egyszerű véletlenszerű mintavétellel 20 felnőtt hím egeret választottak ki 27,5 ± 1,5 gramm (g) átlagos testtömeggel Ohaus-állati skálán (Tripe Bean Balance, 700-as sorozat, Florham Park, NJ, USA). ketrecek, 12 óra (h) fény/12 óra sötétség fényciklus alatt, a "Dr Haity Moussatchй" (UNIHM) funkcionális tudományok kutatóegységének biotériumának szabványosított körülmények között, UCLA állatorvos (DCV). Ingyenes hozzáférés a vízhez és kereskedelmi takarmány a Ratarina® egerek számára (Protinal, Venezuela). A tanulmány a FONACIT-Venezuela bioetikai és biológiai biztonsági kódexének megfelelően készült [10].

Alkoholmentes HG kiváltása:

Az állatokat véletlenszerűen osztottuk szét két, egyenként 10 állatból álló csoportban: egy kontrollcsoportban és egy másikban DL-etioninnal (Sigma Chemical Co., MO, USA) injektálva, steril fiziológiai oldatban oldva, i.p. 7,5 mg/20 g testtömeg dózisban. A kontrollokat csak a vivőanyaggal (steril fiziológiai oldat) injektáltuk. Mindkét csoport 48 órás böjtön esett át, ingyenes hozzáféréssel az ivóvízhez.

Mintavétel, meghatározások:

48 órán át tartó éhezés után az egereknek coccygealis venipunktúrával vérmintát nyertünk, amelyet etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) -Na 2% antikoagulánssal kezeltünk. A plazmákat centrifugálással (800 g, 20 4 perc) szétválasztottuk hűtött Eppendorf 5402 mikrocentrifugában (Brinkman Instr., NY, USA), és Mabe RMT hűtőszekrényben, 41XMVEB (Kolumbia) tartottuk. Miután a vérmintát nyertük, az állatokat könnyű érzéstelenítéssel, éterrel elaltattuk. A májat feldaraboltuk, makroszkópos megjelenését értékeltük, és 250 mM Tris-szacharóz pufferbe tettük (pH = 7,2, 4 ° C-on). 1,5 g májat súlyának háromszorosával trisz-szacharóz pufferben 4 ° C-on homogenizáltunk egy NSI-12 Bodine fazekasban (Electric Comp., Chicago, USA). A homogenizátum felülúszóját ionmentes vízzel 1:40 arányban hígítva hűtőszekrényben tartjuk, amíg a megfelelő elemzéseket elvégezzük.

A HG nagyságának és jellemzőinek meghatározása: 10% -os pufferelt formalinban rögzített máj kis részét felhasználták hisztopatológiai vizsgálatához, amelyet az Állatorvosi Kórház Patológiai Anatómia laboratóriumában végeztek „Dr. Humberto Ramnrez Daza ”, a DCV-UCLA. A szövet 4 mikronos metszetét Jung AG mikrotóm (Heidelberg, Németország) alkalmazásával, majd a metszetek ezt követő festésével hematoxilin-eozinnal, a szokásos technikával végezzük.

A májzsír-lerakódás mennyisége: A májhomogenát hígított felülúszójában a trigliceridek koncentrációját enzimatikus módszerrel határoztuk meg Qualitest készlet (Ind. Qualitest, Caracas, Venezuela) alkalmazásával. Az eredményeket milligrammban (mg) triglicerid/mg fehérje fejeztük ki, amelyeket a Pierce kit (ILL, USA) segítségével határoztunk meg Bradford technika alapján [5].

A lipoperoxidatív lebomlás termékeinek mennyiségi meghatározása: A máj homogenizátum felülúszójában a konjugált diének (DC) koncentrációját határoztuk meg Wallin által leírt módszerrel [22], valamint a malondialdehid (MDA) koncentrációját a TBARS (reagálók barbiturát 2-tiosavval) Ohkawa szerint [21].

A májfunkció károsodásának meghatározása: A plazmában az alanin-aminotranszferáz (ALT) és az aszpartát-aminotranszferáz (AST) aktivitását kereskedelmi készletek (Wiener lab, Rosario, Argentína) segítségével határozták meg. Az összes spektrofotometriás leolvasást egy Genesys 5 (NY, USA) készüléken végeztük.

Az eredmények statisztikai elemzése: Az SPSS (Statistical Package for the Social Sciences or Statistical Product and Service Solutions) statisztikai szoftver segítségével, a Windows 17.0 verziójához. Az eredményeket az értékek átlagaként fejeztük ki ± standard hiba. Az eredmények statisztikai szignifikanciájának megállapításához a Student „t” tesztjét alkalmaztuk, amely 95% -os bizonyosságot igényelt (P EREDMÉNYEK ÉS MEGBESZÉLÉS

A 2. ábrán Az 1A. Ábra a kontroll felnőtt felnőtt hím NMRI egér májának makroszkopikus megjelenését mutatja sötét árnyalattal és az 1B. Ábrán egy DL-etioninnal injektált állat máját, amelynek világos színe eltér a kontrollállattól. A kontroll felnőtt hím NMRI egerek májának szövettani vizsgálata normál megjelenésű májsejteket mutatott (1C. Ábra). A DL-etioninnal kezelt egerek májában azonban mérsékelt májzsírmetamorfózist figyeltek meg, a hepatocitákban nagy és kicsi citoplazmatikus vakuolákkal, megalociták és pecsétes gyűrűsejtek jelenlétével (1D. Ábra).