Centrifugaci; n
A centrifugálás egy ülepítési technika, amelyet a centrifugális erő alkalmazásával gyorsítanak fel. A következők keverékeinek elemzésére vagy elválasztására vonatkozik részecskék, sejtek, organellumok vagy molekulák.
A centrifugálás elmélete és a kvantitatív szempontok: lásd Luque, 123. o. Vagy Freifelder, 298. o.
Hangszeres
1. Cső
Üvegből vagy műanyagból. Kémiailag ellenálló (oldószerek, reagensek) és fizikailag (feszültség az alkalmazott nagy sebességnél). Különböző méretű és alakú. Speciális műanyagok nagy sebességhez.
2. Centrifugák
Szabályozhatja a sebességet, az időt, a hőmérsékletet. Nagy sebesség (10 2 -10 5 1/perc).
3. Rotorok
| Kétféle: | szögletes vagy rögzített szögű rotor | lengőkar rotor |
Modalitások
A sebesség szerint:
| Hozzávetőleges kritérium: | |
| Kis sebességű centrifugálás | kevesebb, mint 10 000 fordulat/perc |
| Nagy sebességű centrifugálás | 10 000 és 20 000 fordulat/perc között |
| Ultracentrifugálás | több mint 20 000 fordulat/perc |
A célnak megfelelően:
1. Analitikai centrifugálás
Cél: megmérjük a leülepedő részecskék fizikai tulajdonságait, például ülepedési együtthatójukat vagy molekulatömegüket. Különösen a változatban ultracentrifugálás analitika.
A molekulákat optikai rendszeren keresztül figyeljük meg alatt centrifugálás. A centrifuga csövének kvarcnak kell lennie, hogy a látható és az ultraibolya fény áthaladjon. Swing rotor, függőleges megfigyelés.
2. Preparatív centrifugálás
Leggyakrabban használt. Cél: izoláljon részecskéket, sejteket vagy molekulákat elemzés céljából vagy későbbi felhasználás céljából. Általában nagyobb mennyiségű mintát használnak fel, mint az elemzésben.
Attól függően, hogy milyen közegben centrifugálják, és a minta felvitelének módjától:
1. Differenciál centrifugálás
(Más néven mobilhatár). A csövet mintával töltjük meg és centrifugáljuk. A minta egyes komponenseinek viselkedése alakjától, méretétől, sűrűségétől függ és logikailag a centrifugálási körülményeket. Csak 2 frakciót kapunk: üledéket és felülúszót.
[Megjegyzés: a csapadék szó alkalmasabb oldhatatlan dologra, amely centrifugálással vagy más mechanizmusokkal (pl. Kémiai reakcióval) csapódik le; üledék helyesebb, ami arra kényszerült, hogy az aljára menjen, de még mindig oldódik; pellet egy angol szó, ami centrifugálás eredményeként az aljára tömörül]
A kb tipikus az szubcelluláris frakcionálás (a sejt különböző komponenseinek, főleg az organellumok elválasztása) (lásd Luque vagy Alberts), egymást követő centrifugálással, növekvő sebességgel.
2. Zonális vagy ülepedési sebességű centrifugálás
A mintát vékony rétegben visszük fel a centrifugáló közegre, amely a sűrűség gradiens. Centrifugális erő hatására a részecskék a gradiensen keresztül diszkrét zónákban vagy sávokban koncentrálódnak. Haladási sebességed (és ezért az elválasztó mechanizmus) méretétől, alakjától és sűrűségétől függ; mindezek a paraméterek kombinálódnak az ülepedési együtthatóban,
" Ülepedési együttható "= s = (" az ülepedés sebessége ")/(" centrifugális gyorsulás ")"
amelyet svedberg egységekben mérünk (1 = 10 −13 másodperc).
A centrifugálásnak véget kell érnie, mielőtt bármelyik elválasztott részecske eljutna a cső aljára. A különálló komponenseket külön-külön gyűjtik össze a különféle sávok nagyon óvatos leszívásával, vagy jobb esetben a cső aljának átlyukasztásával és a leeső folyadék frakcionált gyűjtésével.
A szétválasztás animációja látható.
A sűrűségi gradienst egy koncentráció-gradiens hozza létre: növekszik a megfelelő komponens koncentrációja a csövön lefelé haladva. Ehhez szacharózt, cézium-kloridot, albumint, szarvasmarha magzati szérumot használnak. vagy kereskedelmi média, például Ficoll - szintetikus poliszacharid -, Percoll, metrizamid.
Felkészülhet:
még szakaszos gradiens vagy lépcsőzetesen, manuálisan
b) a folyamatos gradiens, gradiensképző eszköz segítségével