Zsírközvetített perivaszkuláris érrendszeri diszfunkció és átalakulás az ampk mtor útján keresztül

perivaszkuláris

  • Tárgyak
  • Összegzés
  • Bevezetés
  • Mód
  • Kémiai termékek
  • Állatok
  • Aorta érrendszeri reaktivitási vizsgálat
  • Mesenterialis érrendszeri reaktivitási vizsgálat
  • Sejtkultúra
  • Western blottolás
  • Szövettan
  • Statisztika
  • Eredmények
  • A PVAT hatása az aorta reaktivitására
  • A PVAT hatása a mesenterialis artéria reaktivitására
  • A HFD csökkenti az eNOS aktivitást
  • Aorták és PVAT átalakítása patkányokban HFD-ben
  • AMPK és mTOR expresszió patkány aortákban HFD-ben
  • A PVAT hatása az AMPK/mTOR expressziójára tenyésztett VSMC-ben
  • Vita

Tárgyak

  • Sejtjelzés
  • Zsírok
  • Elhízottság
  • Érbetegségek

Összegzés

Mód

Kémiai termékek

A fenilefrint (PE), az acetilkolint (ACh) és a nitroglicerint (NTG) a Sigma-Aldrich-től (Taufkirchen, Németország) vásároltuk.

Állatok

6-8 hetes hím Wistar patkányokat a Charles River-től (Sulzfeld, Németország) szereztünk be. A patkányokat 12/12 órás nappali/éjszakai körülmények között helyeztük el, és minden állatnak ad libitum táplálékot és vizet adtunk. A helyi állatgondozási és -használati bizottság jóváhagyta az összes állatgondozási és -használati eljárást. A kutatás megfelel az Egyesült Államok Nemzeti Egészségügyi Intézete által kiadott, a laboratóriumi állatok gondozására és felhasználására vonatkozó útmutatónak (NIH, 85–23. Kiadvány, felülvizsgált 1996). Az állatok standard táplálék-étrendet kaptak (kontrollcsoport, n = 18) vagy HFD-t (HFD-csoport, n = 18) 6 hónapig.

Aorta érrendszeri reaktivitási vizsgálat

Mesenterialis érrendszeri reaktivitási vizsgálat

Sejtkultúra

A VSMC-t patkány mellkasi aortákból nyertük, és szöveti explantációs módszerrel tenyésztettük, amint azt csoportunk korábban leírta. 27 perivaszkuláris adipocitát nyertünk periaorta zsírszövetből, és tenyésztettük a fent leírt szöveti explantációs módszerrel. 28 VSMC/adipocita kokultúrát hoztak létre 10 μM C ​​vegyület, egy AMPK inhibitor (Calbiochem, San Diego, CA, USA) jelenlétében vagy hiányában, amint azt korábban a porózus polietilén-tereftalát tenyész műanyag betétjeinek ellentétes oldalán leírták. hatékony tenyésztési terület 0,3 cm 2, pórusméret 0,4 μm és pórus sűrűség 1 × 108/cm 2 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA).

Western blottolás

Szövettan

Az aorta tunica vastagságát bevett módszerekkel határoztuk meg. Az aorta szövetet 10% formaldehid/foszfátpufferolt sóoldatban rögzítettük és paraffinba ágyazottuk. A rutinszerű szövettani eljárások után az első bordaközi artéria közeli keresztmetszeteket Victoria Blue és Ponceau S festékkel festették és × 200 nagyítással tanulmányozták. A képeket digitális fényképezőgéppel készítettük Nikon TE2000 mikroszkóp segítségével (Nikon Corporation, Tokió, Japán). A tunica táptalajt a belső és a külső rugalmas lamina közötti régióként határoztuk meg, amelyet az artériás szakaszok négy ortogonális pontján mértünk állatonként három egymást követő aorta gyűrű során a NIS-Elements 3.0 (Nikon Corporation) képalkotó szoftverrel.

A periaorta adipocita méretét a korábban leírtak szerint mértük. Hat patkányból 30 periaorta zsírszövetet gyűjtöttünk be, 10% -os pufferolt formalinnal rögzítettünk, paraffinba ágyazottuk, és hematoxilinnel és eozinnal festettük. A képeket Nikon TE2000 mikroszkóppal (Nikon Corporation) rögzítettük, és az egyes patkányokból kivont összesen 100 adipocita területét a NIS-Elements 3.0 képalkotó szoftver (Nikon Corporation) segítségével határoztuk meg.

Statisztika

Az adatok átlag ± szem. A fele maximális hatékony agonista koncentrációt (EC50) és a maximális választ (E max) az egyes agonista koncentráció-válasz görbékből számoltuk, a GraphPad Prism 3.0 (San Diego, CA, USA) alkalmazásával. Az átlagértékek statisztikai különbségeit adott esetben Student-féle t-teszt vagy egyirányú varianciaanalízissel Bonferroni többszörös összehasonlító post hoc tesztekkel értékeltük. A 0,05 alatti kétoldalas P-értékeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.