A DOHÁNY, AZ ALKOHOL, A TÚLSÚLY ÉS A FIZIKAI TULAJDONSÁGOK MEGHATÁROZÓ HATÁSA
Sergio Hugo Sánchez-Rodríguez 1, Elena Donaji Ramírez-Alvarado 2, Gerardo Enrique Barajas- Vásquez 3, César Salvador Cardona-Félix 4
1 természettudományi doktor (élettan). Sejtbiológiai Osztály. Kísérleti Biológia Akadémiai Egység. Zacatecasi Autonóm Egyetem.
2 Természettudományi Master (biológia). Sejtbiológiai Osztály. Kísérleti Biológia Akadémiai Egység. Zacatecasi Autonóm Egyetem.
3 Természettudományi Master (biológia). Sejtbiológiai Osztály. Kísérleti Biológia Akadémiai Egység. Zacatecasi Autonóm Egyetem.
4 hallgató (Q.F.B.). Vegyészettudományi Kar. Zacatecasi Autonóm Egyetem.
Levelező szerző: Sergio Hugo Sánchez-Rodríguez
Sejtbiológiai Osztály
Email: [e-mail védett]
Absztrakt
Kulcsszavak
Hsp, stressz, környezeti média
Bevezetés
Valamennyi szervezet szenved a környezeti stressztől, és a legmegfelelőbb alkalmazkodik. Ez a fogalom azt jelenti, hogy az adaptáció az egyénnek a környezetéhez való alkalmazkodásának mértéke; más szóval, az adaptáció az a fok, amely alatt az egyén anyagcsere-folyamata alkalmazkodik a környezet jellemzőihez. [1]
Általában a stressz kifejezést a fiziológiában a jólét ellentétének jelölésére használják. [2] Így a stresszt minden olyan erő hatásának tekintik, amely hajlamos bármely homeosztatikus folyamatot a biológiai szerveződés bármely szintjén túlmutatni a szokásos határokon. [3]
Magától értetődik, hogy a stresszor olyan tényező, amely a stresszminta reakcióját idézi elő, nemcsak fizikai természetű, hanem érzelmi is lehet, például gyűlölet, harag vagy félelem. Valójában a pszichológiai stimuláció az egyik leggyakoribb kiváltója. [4]
A stressz klimatikus lehet, például erős hideg vagy meleg, táplálkozási, szociális vagy betegség. [5] Ökológiai szempontból a stressz akkor következik be, amikor a fizikai, kémiai és/vagy biotikus tényezők túlszárnyalják az organizmust az alapvető rés határain. [3]
Az organizmus kedvezőtlen körülményei, legyen az a környezet, viselkedési szokásai vagy étrendje, az idegrendszeren és az endokrin rendszeren keresztül valósul meg, és segítenek az organizmusoknak elkerülni a stresszt. [6] A stresszhez való alkalmazkodás neuroendokrin, pszichológiai és viselkedési változások széles skáláját idézi elő, amelyek lehetővé teszik a belső homeosztázis fenntartásához szükséges gyors felépülést vagy alkalmazkodást. [7.8]
Azt találták, hogy a hősokkfehérjékként (Hsp) vagy stresszfehérjékként ismert fehérjék egy csoportja is segíti az organizmusokat sejtszinten a stressz ellensúlyozásában. [9-14] A Hsp-t különféle stresszorok indukálják, [15,16] többek között: hipoglikémia, anoxia, hő, etanol, hidrogén-peroxid, nehézfém-ionok, arzénok, bizonyos vírusokkal való fertőzések, [17,18] autoimmun betegségek például szisztémás lupus erythematosus, [19] táplálék- és vízhiány miatt, [20] ultraibolya sugárzás, alacsony frekvenciájú elektromágneses sugárzás, intenzív gammasugárzási mezők [21,22] és alacsony intenzitású gammasugarak. [2. 3]
A környezet minden organizmusban stresszfaktor, és különösen az ember életstílusa folytán több stresszt okozhat szervezetében a kialakulásuk során tapasztalt szokások vagy függőségek miatt. A legismertebb káros szokások az alkoholizmus, a dohányzás, az étrend rendellenességei, a drogfüggőség (különféle), a túlzott testmozgás, a mozgásszegény életmód stb.
Ebben a projektben azt vizsgálták, hogy az egyének mely élettani mechanizmusokat aktiválják, ami lehetővé teszi számukra, hogy alkalmazkodjanak a különböző típusú stresszekhez, például: testmozgáshoz, elhízáshoz és kémiai szerekhez (dohány és alkohol). Ehhez a Hsp70 és 90 kalórsokkfehérjék tanulmányozására összpontosítunk, mivel ez normális módon expresszálódik a baktériumok, élesztők és emberek minden szervezetében. [13,24] A Hsp70 feladata, hogy megvédje a sejtet a stressz károsodásaitól azáltal, hogy részlegesen denaturált fehérjékhez kötődik, fehérje aggregátumokat disszociál, és szabályozza a de novo szintetizált fehérjék helyes hajtogatását és intracelluláris transzlokációját. [25,26] Hasonlóképpen, a Hsp90 funkciója megakadályozza a stressz során kibontakozó és a szteroid hormon receptorokkal társuló fehérjék összetapadását, hogy gyorsan reagáljanak a jelekre, [27] fontos szerepet játszik az enzimek szabályozásában és a fehérje transzkripciójában. [28] Általában a Hsp90 szervező szerepet játszik, amely összehozza a molekulákat és elősegíti azok megkötését. [29]
Jelen tanulmány célja az volt: A sportolók, elhízottak, alkoholisták és dohányosok limfocitáinak által okozott stressz mértékének meghatározása a Hsp70 és 90 hőstressz fehérjék expresszióján keresztül.
Anyag és módszerek
Tanulmányozott egyének.
Kiválasztották azokat az egyéneket, akiknek átlagéletkora 18 és 22 év között volt, férfi. 4, egyenként 4 tagú csoportot alakítottak ki állapotuknak és szokásaiknak megfelelően (dohányosok, elhízottak, akik jelentősen fogyasztottak alkoholt és intenzív testmozgást végeztek, valamint egészséges egyének csoportja).
Limfociták megszerzése.
A vizsgálati személyek vérmintáit használták limfocitáik izolálására. Minden egyedtől 10 ml perifériás vért nyertünk (Beckton-Dickinson N.J., U.S.A., 10 ml heparin vacutainer csövek). A kapott vérből a limfocitákat Ficoll Histopaque gradienssel (Sigma Chemical Co., St Louis MO, USA, 1077-1) izoláltuk, Boyum (1968) által leírt technikát követve. [30] Az egyes egyedek limfocitáit RPMI 1640 táptalajon tenyésztettük (Gibco BRL, Grand Island NY, USA, 11876-026), kiegészítve 100 U/ml penicillinnel, 100 ng/ml sztreptomicinnel (In Vitro, Mexikó, DF), 0,08 U/ml inzulin (Eli Lilly México, DF) és 5% -os szarvasmarha-magzati szérum (Gibco BRL, Grand Island NY, USA, 16000-044). Minden egyes egyedből meghatároztuk a limfociták életképességét
megszerzésük pillanata a tripánkék kizárási technikával (Sigma Chemical Co, St Louis MO, USA, T-6146).
Sejt stressz. Az egyes egyedek RPMI táptalajban lévő limfocitáit 3 részre osztottuk. Alikvot részt vettünk kontrollként a Hsp bazális szintjének meghatározásához. egy másikat 3 órán át 40 ° C-on tenyésztőkemencében hőterhelésnek vetettek alá, egy másikat pedig UV-fénynek, UV-A fénylámpával (Black-Ray lamp UVL-56). A besugárzás 3 órán át 366 nm volt, amelynek végső dózisa 5-30 mJ/cm2 volt. [31] Hő és UV fény által okozott stressz után újra meghatározták a limfociták életképességét.
Limfocita lízis és SDS-PAGE: Az UV és hőterhelésnek kitett limfocitákat háromszor mostuk sóoldatos foszfát oldattal (PBS; pH 7,2) ((Gibco BRL, Grand Island NY, USA, 21300-058), 0,5 ml puffert adtunk hozzá. 1% Tritont tartalmazó lízis. X-100, 140 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl (pH 7,6) és 1 mM proteáz inhibitor, PMSF (Sigma Chemical Co, St Louis MO, USA, P-7626) A lizátumot 10 percig 1600 g-on centrifugáltuk. és a felülúszót kinyertük, és meghatároztuk a fehérje koncentrációt. [32] A fehérje mennyiségi meghatározását Bradford (1976) által leírt technikával hajtottuk végre. [33] Minden kísérleti körülményhez 30 μg fehérjét jellemeztünk poliakrilamid gélekben (10%). SDS-PAGE) Laemmli (1970) által leírt technika szerint. [34]