DIAGN; STICO OF Helicobacter spp
Jóváhagyás: 2017. október 11
Kulcsszavak: Gyomor, gasztroszkópia, lélegzetvizsgálat, fekély.
Kivonat: A lovak fekélyes gyomor szindróma (EGUS) egy multifaktoriális entitás, amely gyomornyálkahártya elváltozásokat okoz. Az EGUS-t olyan kockázati tényezőkhöz társították, mint például az állattartás, a gabonaellátás, a testmozgás miatt fellépő hypergastrinemia, a stressz, a nem szteroid gyulladáscsökkentők (NSAID) és a dysbiosis (Helicobacter spp.). A vizsgálat célja a Helicobacter spp. Kimutatása volt. a ló gyomornyálkahártyáján és annak összefüggését az EGUS-szal. Húsz, különböző fajtájú, mindkét nemű, istállóban tartott lovat értékeltek. Nyelőcső-gasztro-duodenoszkópiát és a mirigy nyálkahártyájának biopsziáját végeztük. A mintákat Urease Rapid Testnek (URT) vetették alá, és Urea Breath Testet (UBT) végeztek a vizsgált populációban. Leíró statisztikákat, valamint érzékenység/specifitás tesztet fejlesztettek ki. Az ureaztermelési tesztek kevésbé voltak érzékenyek az „arany standard” tesztre (karbamid-agar); Nem sikerült meghatározni az ureáz tesztek és a Helicobacter spp jelenléte, vagy az EGUS közötti megfelelést. A tesztek és az EGUS vagy Helicobacter spp. Közötti összefüggést nem határozták meg, molekuláris diagnózist igényel.
Kulcsszavak: Gyomor, gasztroszkópia, karbamid légzési teszt, fekély.
A Helicobacter egy Gram-negatív, mikroaerofil, spirális, flagellátus baktérium, amelyet kezdetben a Campylobacter nemzetségbe soroltak, de 1989-ben átkategóriázták [14], köszönhetően a gyomorbetegségben szenvedő emberek pylorus antrumában talált mikroorganizmusnak, az ún. azóta Helicobacter pylori. Bár legismertebb formája a spirál, pleomorf. A gömbformák (kokcoidok) tápanyaghiány, antibiotikumoknak való kitettség vagy hosszú inkubációs idő alatt jelennek meg. Feltételezzük, hogy ezek a formák visszatérnek a bacilláris megjelenítéshez a speciális környezeti feltételek szerint, visszaadva fertőző képességüket [1, 14].
A Helicobacter nemzetség közül a legismertebb biokémiai profil a H. pylori, amelynek legjelentősebb enzimatikus aktivitása a karbamid hidrolizálásának képessége, valamint alkalikus foszfatáz, oxidáz és kataláz aktivitással rendelkezik. Bár az ureaz aktivitást viszonylag gyakorinak tartják a Helicobacter fajok között, ezeknek a baktériumoknak az állatok gyomornyálkahártyájában található enzimaktivitása és szöveti hatása különbözik.
A lófélék (Equus ferus caballus) gyomornyálkahártyájában található mikroorganizmusok - mind egészségesek, mind fekélyesek - kapcsolatban vannak a Helicobacter nemzetséggel [3, 7, 8, 16], többek között a H. equorum [12]; Ugyanakkor a Helicobacter részvétele a ló gyomorfekélyes szindróma (EGG) patogenezisében még nem bizonyított, bár feltételezhető, hogy jelenléte a lovak gyomornyálkahártyájában potenciális kockázati tényező a kérdéses szindróma szempontjából. Emiatt a jelen tanulmány célja a baktériumok ureázaktivitási teszteken keresztüli kimutatása volt, amellett, hogy megállapította az összefüggést a SUGE és jelenléte között.
ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
A tanulmány típusa és etikai szempontok
Leíró, prospektív, keresztmetszeti vizsgálatot végeztek kényelmi mintavétellel. A tanulmányt az Antioquia Egyetem állatok gondozásával és felhasználásával foglalkozó intézményi bizottság jóváhagyta a 3082013 protokollon keresztül.
Nyelőcső - gasztro - duodenoscopia
Gasztro-duodenoszkópiát végeztünk, tizenkét, illetve négy órán át (h) koplalva szilárd és folyékony étel esetén. Szedációt végeztünk 10% xilazinnal (Anased®, Lloyd Laboratories, Iowa, USA) (0,5 mg/kg/IV). Ezt követően endoszkópiát végeztünk egy video endoszkóp rendszerrel (PortaScope®, 1800PVS, Bradenton, FL, USA). A makroszkópos eredményeket a gyomorelváltozások mértékének osztályozási skálája szerint osztályozták, amelyeket MacAllister et al. [tizenegy].
Az endoszkóp körút során vizet csepegtettek a gyomornyálkahártya vizualizációjának javítására. Miután elvégeztük a gasztroszkópos kiértékelést és az elváltozások osztályozását, három biopsziát vettünk a gyomor felületéről, a mirigy nyálkahártyájáról (fundus) és a pylorus antrumból, egy rugalmas transz-endoszkópos csipesz behelyezésével (PortaScope®, 1800PVS, Bradenton, FL, USA), gyors ureázvizsgálatok (PRU) elvégzésére.
Gyors Urease Test (PRU)
A PRU elvégzéséhez módosított karbamidlevet készítettek [13], amely 500 ml desztillált vízből állt; 100% karbamid (Merck, Darnstadt, Németország) 10 g; fenolvörös 0,005 g; 0,2% 97% -os sósav; a kapott pH 7 volt, pH-indikátor csíkon át mérve. A levest 0,5 ml-es térfogatokban alikvotizáltuk, és 2 ml-es kriovialokban helyeztük el, mindegyik felvett biopsziát teljesen belemerítettük a húslevesbe és felcímkéztük. A húslevesben lévő mintákat szobahőmérsékleten 12 órán át inkubáltuk későbbi olvasás céljából.
Az ureázreakció azon alapult, hogy karbamidban gazdag közeg volt pH-indikátort (fenolvörös) is tartalmazva. Amikor az ureáz enzim forrását (ebben az esetben az ureáz aktivitású mikroorganizmusokat) mártották, a közegben jelen lévő karbamid hidrolizálásáért volt felelős; A reakcióból származó ammónium és szén-dioxid felszabadulása alkalmassá tette a táptalajt és színváltozást váltott ki sárga (negatív) és intenzív vörös-fukszia szintre, ami pozitív reakciót jelez az ureázaktivitásra (1. ábra).
Húsz mirigynyálkahártya-mintát vettünk két példányban karbamidlevesnek és karbamid-agarnak ("arany teszt") alávetve, amelyet az Antioquia Egyetem Agrártudományi Karának Állat-egészségügyi Mikrobiológiai Laboratóriumában használtak, annak érdekében, hogy érvényesítsék az eredményt mindkettő között. média. A karbamid-agar egy alapgélből (Urea agar Base Christensen® Merck Millipore, MA, USA) 3,6 g, karbamid-sóból (Carlo Erba Reagents SAS, Chaussée du Vexin, FR) 7,5 g és 5 csepp 97% -os sósavból állt. . A húsleves hatékonyságának igazolása érdekében egy pozitív ureázaktivitású mikroorganizmus (Proteus spp.) Oltóanyagát használtuk.
Légzési teszt (Urea Légzési teszt - UBT)
Mindegyik ló alaplégzését vettük, egy üvegcsövet (Exetainer® Vial for 13C breath Testing, Labco limited, Egyesült Királyság) egy orrlyukba vezetve, miközben az ellenoldali egyidejűleg el volt zárva, amikor a ló lejárt, a csövet azonnal lezártuk. Ezt követően mindegyik egyedet az endoszkóp szonda munkacsatornáján keresztül adagoltuk, 50 mg C13 karbamidot (U23001 tétel) 5 ml vízzel hígítva és közvetlenül a gyomor nyálkahártyájára kenve. Ezután 10 perccel a reagens beadagolása után egy második lélegzetet (lejárat) vettünk egy másik üvegpalackba. Mindegyik csövet izotóparányú tömegspektrométeren (ABCA2 Automated Breath CO2 Analyzer, Sercon® limited, UK) olvastuk le. A 2Δ-nál (delta) nagyobb gázarányt bizonyító eredményt pozitívnak tekintették. A várható kémiai reakciót a következő egyenlet képviseli: 13 CO (NH2) + H2O → 2 NH 3 + 13 CO2
Statisztikai elemzés (diagnosztikai vizsgálatok érzékenysége és specifitása)
A diagnosztikai tesztek valódi pozitív ureázreakciók kimutatására való képességének meghatározásához elvégeztük a ROC görbék (a vevő működési jellemző görbéjének) összehasonlítását a PRU, az UBT és a karbamid agar között („arany teszt”). Ezt az elemzést az EPIDAT® V 3.1 szoftverrel végeztük.
Eredmények és vita
Nem volt szignifikáns távolság a standard vonal (átlós) és az értékelt PRU és UBT görbék között (2. ábra), ami azt jelezte, hogy az eredmények a véletlennek tulajdoníthatók, és nem az arany tesztnek való megfelelésnek (Chi teszt 2 = 0,1728; P értéke = 0,67777). A ROC görbe elemzés azt mutatta, hogy sem a PRU, sem az UBT nem érzékeny az ureázaktivitás kimutatására (I. TÁBLÁZAT) az arany teszthez képest.