Mikrobiológiai körülmények a Helicobacter Pylori tenyésztéséhez
A termesztés mikrobiológiai körülményei Helicobacter pylori
Martín Alonso Bayona Rojas, Bact., Esp., Msc. (1)
(1) Az Orvostudományi Kar professzora, az orvosbiológiai kutatások és alkalmazott genetika csoportja (GIBGA). Alkalmazott és Környezettudományi Egyetem U.D.C.A. Bogota Kolumbia. e-mail: [email protected]
Fogadás dátuma: 09-17-12 Elfogadott dátum: 04-16-13
A Helicobacter pylori Nagy jelentőségű a növekedésének jellemzőinek tanulmányozása, valamint hozzájárulni a klasszikus és molekuláris epidemiológia, a genetikai sokféleség és az antibiotikumokra való hajlam ismeretéhez. Ennek a mikroorganizmusnak a jelenléte és jelentősége kórokozóként világszerte arra kényszerít bennünket, hogy fontoljunk meg és javasoljunk hatékony alternatívákat a mikrobiológiai laboratóriumok rutinszerű elkülönítésére és azonosítására. Ennek az áttekintésnek az volt a célja, hogy leírja az irodalmat a mikroorganizmus laboratóriumban történő termesztéséhez szükséges körülményekről.
Kulcsszavak
Helicobacter pylori, mikrobiológia, izoláció, mikrobiális tenyészet.
HÁTTÉR
Kiszámítják, hogy H. pylori a világ népességének 50–75% -át megfertőzi. A mikroorganizmus által fertőzött minden 10 ember közül csak egy szenved betegségben, kilenc pedig soha nem fejlődik ki. A fertőzés etiológiailag a gyomor vagy a nyombél peptikus fekélyeinek megjelenésével és egy speciális típusú gyomor limfóma kialakulásával, az úgynevezett maltomával társul; ugyanígy részt vesz a gyomorrák kialakulásának etiológiai multikauzális láncolatában (1). Valójában az Egészségügyi Világszervezet ezt a kórokozót az ember biológiai rákkeltőjeként osztályozta (1. kategória), ahol a fertőzések előfordulási gyakorisága a fejlődő országokban gyermekkorban fordul elő, és úgy tűnik, hogy összefügg a gazdasági feltételekkel. És kedvezőtlen higiénés-egészségügyi ( 3). Úgy tűnik, hogy a különböző törzsek összefüggésben vannak virulenciájuk sokféleségével és a tényezők kölcsönhatásával, többek között az etnikai származás, a rossz táplálkozás, a túlzsúfoltság, a földrajz és az életkor között (4).
Ez a cikk a növényorientált mikrobiológiai szempontok és az abban rejlő tényezők áttekintését mutatja be. A bibliográfiai kereséshez a következő adatbázisokat tárták fel: Medline, Proquest, Embase, Jstore, Pubmed, Hinary, Springer, Nature, Science online és Oxford Journal, valamint olyan magánfolyóiratokban, mint a Plos, a Nas és az Imbiomed. A kifejezéseket kombinálták: Helicobacter és karbantartás, kiegészítők Helicobacter, Laboratóriumi karbantartás, szilárd táptalajon történő tenyésztés, érzékenység az antibiotikumokra.
Kolumbiában az Universidad del Valle által a kolumbiai Tudományos és Technológiai Fejlesztési Intézettel finanszírozott kutatás során 69,1% -os fertőzés előfordulásáról számoltak be. H. pylori Kolumbia 16 osztályának regionális kórházaiban az emésztőrendszer felső endoszkópiájából vett biopsziás mintákban. A korábbi évtizedekben a savas peptikus betegség és a gyomor adenokarcinóma okainak kutatása elsősorban az étrendi tényezőkre összpontosított, de H. pylori mint gyakori gyomor kórokozó megváltoztatta az etiológiai fogalmakat ezekről és más gastroduodenalis betegségekről (5).
Tanulmányozása H. pylori Hazánkban az előző évtized végén kezdődött, és kevés jelentés található laboratóriumokról, akik tapasztalták az izolálásához és termesztéséhez szükséges mikrobiológiai készségeket (6).
MIKROBIOLÓGIAI JELLEMZŐK
A nemzetség tagjai Helicobacter 1989-ben írták le, kolonizálják az emberek és egyes állatfajok gyomrát és belét, ez egy ívelt, mikroaerofil Gram-negatív bacillus, külső membránja és 4-8 poláris flagellája van, amelyet lipidszerkezet-burkolat véd. Az általa termelt enzimek: ureaz, kataláz és citokróm-oxidáz. Az urea az egyik baktérium virulencia tényezője H. pylori amely a karbamidot NH3-vá és vízzé alakítja, ezáltal lúgosítva a környező savas környezetet; egyéb tényezők a lipázban, adhezinekben, katalázban, a vérlemezkéket aktiváló faktorban, a citotoxinnal társított Cag A gén fehérjéjében, B képében (amely citokineket indukál) és a vakuolizáló citozin Vac A-ban (3, 7).
A tenyésztéshez a mintákat a gyomor nyálkahártyájából, és a fog lepedékéből, a végbélből, a hólyagból és a nyelőcsőből vett extragasztrikus mintákat veszik; a kolóniák kialakulásához szükséges idő 4-7 nap, a következő körülmények között: 5-10% 02; 5-10% C02; 80-90% N2, 95% páratartalom és 35-37 ° C hőmérséklet. Általában összetett közegben termesztik vérrel, szérummal és antibiotikumokkal (7).
A MINTAVÉTEL FELTÉTELEI
A krónikus gyomorhurutban szenvedő betegeknél a biopsziák felvételének ajánlott protokollja a Sydney-rendszer által javasolt. meg kell említeni, hogy H. pylori Főleg a gyomor antrális részében található meg, kivéve azokat az egyéneket, akiket PPI-k és anti-H2 antihisztaminok kezeltek, ahol nagyobb sűrűség található a testben. 5 biopsziát kell venni az alábbiak szerint: két antrális mintát a nagyobb és a legkisebb görbületből 2–3 centiméterre a pylorus közelében, két testet a testből a nagyobb és a legkisebb görbületből, 8 cm-re a kardia távolságától, és egy mintát a incisura angularis (8). E protokoll alkalmazásával a baktériumok gyakorlatilag minden fertőzött egyedben kimutathatók (9). A biopszia felvétele gyakorlatilag fájdalommentes folyamat a páciens számára, de ez egy olyan eljárás, amelyet szakértő gasztroenterológusnak kell elvégeznie a bevett orvosi etikai protokollok betartásával. Nem ajánlott az eljárást vérző fekélyű betegeknél végrehajtani, mivel ez vérzési veszélyt jelenthet. Valamennyi tanulmányt az Etikai Bizottságnak jóvá kell hagynia, és egyértelmű tájékoztatáson alapuló beleegyezéssel kell rendelkeznie.
Más gyomormintákat, például gyomornedvet használtak, amelyeket a húrpróba és a hányástól való izolálás során nyertek, és más eredményeket hoztak. H. pylori Alkalmanként tenyésztették extragasztrikus mintákból is, mint pl. Fog plakk, nyelőcső, végbél és húgyhólyag.
Szem előtt tartandó szempontok: ha a beteg antibiotikumot kapott, az utolsó adag után legalább négy hetet kell várni, hogy kielégítő eredményeket érjen el a tenyésztés szempontjából. A csipeszeket, amelyekkel a biopsziákat végzik, megfelelően fertőtleníteni kell a betegek közötti szennyeződés elkerülése érdekében; Ha a fertőtlenítés túl erős, ez befolyásolhatja a baktériumok életképességét.
A biopsziás mintákat kis mennyiségű fiziológiás sóoldattal meg kell őrölni vagy porítani, mielőtt a táptalajra felviszik. A homogén mintát azonnal a táptalaj felületére kell helyezni: fogantyúval kell venni, majd elkülönítésre szolgáló szórási módszerrel el kell teríteni a felületen (8, 9).
A kapott mintákat gyorsan fel kell dolgozni, mivel a mikroorganizmus nagyon érzékeny a környezetre. A biopsziás mintákat (amelyeket az antrumból és a testből vettek) steril csavaros kupakba kell tenni, 0,5 ml sóoldattal, és legfeljebb 6 órán át ott maradhatnak. Ha késés várható, olyan szállítóeszközt kell használni, mint a Stuart táptalaj, és 4-8 ° C hőmérsékleten kell tartani, legfeljebb 24 órán át a feldolgozás előtt, majd homogenizálni és két példányban elvetni különböző táptalajokba, beleértve a húslevest és a táptalajt. agar Brucella, A BHI, a Mueller Hinton, a Columbia agar és a szójabab triptikáza általában marha magzati szérummal, vörösvértest-lizátummal, élesztő-kivonattal, peptonnal és cianobaktérium-kivonattal egészül ki. Vért (ló, bárány, nyúl) általában 7 és 10% között adnak, és a táptalajba adott antibiotikumok között szerepelnek: vankomicin, szulfametoxazol, trimetoprim, cefsulodin és polimixin B. A mintákat triptikáz szójalevesben vagy BHI-ben tárolhatjuk 20% glicerinnel, amelyeket -80 ° C-on fagyasztóban vagy folyékony N2-ben (10-12) tárolnak.