A citotoxikus aktivitás és a szülővegyületek bioenergia-metabolizmusa közötti kapcsolat
A növényi eredetű vegyületek citotoxikus aktivitása és bioenergia-metabolizmusa közötti kapcsolat. Végső fokozatú projekt [Írja ide] Pablo Fuentes Orozco Biológiai Kar. Sevilla, 2015
A szüleimnek és a nővéremnek, hogy motiváltak és hittek bennem abban a pillanatban, amikor elkezdtem ezt a karrier nevű projektet. Anyámnak köszönöm a szeretetet, amelyet átadsz nekem, és hogy minden szenvedélyedet belém fekteted. Apámnak köszönöm, hogy megtanítottad, mi a bátorság, és mert senki sem tudja, hogyan kell hallgatni, mint te. Szeretnék köszönetet mondani oktatómnak, Javier Ávilának, köszönöm, hogy türelemmel és lélekkel irányítottak, Elena Talerónak, Azahara Rodrígueznek és Antonio Alcaide-nak is, minden biztató mozdulatért, és hogy az időmet rendelkezésemre bocsátották. Végül, és nem utolsósorban, köszönet minden barátnak, aki velem volt ezekben az években, az első és utolsó érkezőknek, minden őrültnek, aki megcsinálja a napomat, és mindenkinek, aki hallgatott és támogatott, amikor nem vagyok ott senki. Köszönjük, hogy egy baráti társaságot családtá tettél. Köszönöm Kalise. Ha valami nagyon érdekel, küzdj érte. Ha falnak ütközik, menjen át rajta! Van valami, amit tudnod kell a kudarcról. Soha nem szabad hagynod, hogy megverjen. (Haddock kapitány)
TÁRGYMUTATÓ Rövidítések összefoglalása i ii I. BEVEZETÉS 1 1. Oxilipinák a Növényi Királyságban 1 1.1. Jasmonates. Biológiai funkciók 2 1.2. A metil-jazmonát rákellenes hatású szerként 3 2. Oxilipinek az állatvilágban 5 3. A rák jelenlegi állapota 6 II. CÉLOK 8 III. ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK 9 1. Felhasznált anyag 9 1.1. Metil-jázmonát 9 1.2. Sejtkultúrák 10 2. In vitro vizsgálatok 11 2.1. A metil-jázmonát citotoxikus aktivitásának értékelése 11 2.1.1. Sulforhodamine B 11 módszer
2.2. Bioenergetikus anyagcsere vizsgálatok 12 2.2.1. ATP számszerűsítése 14 2.3. A metil-jázmonát gyulladáscsökkentő aktivitásának értékelése 14 2.3.1. Alfa-tumor nekrózis-faktor termelése 14 3. Statisztikai elemzés 15 IV. EREDMÉNYEK 16 1. A metil-jászmonát citotoxikus aktivitása 16 2. Citotoxikus mechanizmusok. A bioenergetikus anyagcserére gyakorolt hatások 19 3. A metil-jászmonát gyulladáscsökkentő hatása 21 V. MEGBESZÉLÉS 23 VI. KÖVETKEZTETÉSEK 27 VII. BIBLIOGRAPHY 28
Rövidítések AA arachidonsav ADP adenozin-biszfoszfát AJ jázmonsav ANOVA varianciaanalízis ATP adenozin-trifoszfát CJ cisz-jazmonát COX-ciklooxigenáz DEX-dexametazon-DHA-dokozahexaénsav DMSO-dimetil-szulfoxid ELISA-vizsgálat immunabszorpcióval rák ICEN acid hatóanyag 50 gátló koncentráció 50 IL interleukin J2 metil 4,5-didehidrojasmonát J7 metil 5-klór-4,5-didehidrojasmonate LLC krónikus limfocita leukémia LOX lipoxigenáz LPS lipopoliszacharid MJ metil jázzmonát WHO egészségügyi világszervezet OPDA 12-oxo-fitodainsav OXLs oxilipinek pufferolt foszfát-sóoldat PMA forbol-acetát-mirisztát ROS oxigénreaktív fajok SRB szulfodamin B TCA triklór-ecetsav THP-1 humán akut leukémia monocita vonal TNF-α tumor nekrózis faktor alfa TRAIL TNF-α 2-DG-vel kapcsolatos apoptózis indukáló ligandum 2-dezoxi-D-glükóz én
1. ábra A jázmátok biológiai funkciói és jelzésük biotikus és abiotikus folyamatok által közvetítve. 1.2. Metil-jazmonát, mint rákellenes hatású szer. Az MJ egy természetes ciklopentanon (2. ábra), amely növényi stresszválasz hormonokként az oxilipin családba tartozik (Liechti és Farmer, 2002). Termelését különféle környezeti abiotikus jelek (UV-sugárzás, ozmotikus stressz és hőmérséklet-változás) és biotikus (kórokozók, növényevők) indukálják (Ryals et al., 1996; Beckers és Spoel, 2006; Van der Ent et al., 2009), és közvetíti a jelzést, amely aktiválja a védekező reakciókat az ilyen típusú stresszekkel szemben (Vasyukova et al., 2009). Amellett, hogy növényi másodlagos metabolitként működik, kiváltja a növényvédelmet, az MJ figyelemre méltó hatást gyakorol az emlős rákos sejtekre (Avdiushko et al., 1995; Kato et al., 1993; Melan et al., 1993; Fingrut és Flescher, 2002 ). A jasmonátok megváltoztatják a növény mitokondriális funkcióját, és reaktív oxigénfajok (ROS) képződését idézik elő, ami az emlősök apoptózisához hasonló úton sejthalálhoz vezet (Soares et al., 2010; Zhang és Xing, 2008). Megállapították, hogy az MJ-nek 3 van