A gasztrointesztinális fiziológia modulációja Lactobacillus casei és

В
В

SciELO-m

Testreszabott szolgáltatások

Magazin

SciELO Analytics
Google Tudós H5M5 ()

Cikk

Spanyol (pdf)
Cikk XML-ben
Cikk hivatkozások
Hogyan lehet idézni ezt a cikket
SciELO Analytics
Automatikus fordítás
Cikk küldése e-mailben

Mutatók

Idézi SciELO
Hozzáférés

Kapcsolódó linkek

Idézi a Google
Hasonló a SciELO-ban
Hasonló a Google-on

Részvény

A Navarra Egészségügyi Rendszer évkönyvei

verzióВ nyomtatva ISSN 1137-6627

Anales Sis San Navarra 29. kötet, 3. szám, Pamplona, 2006. szeptember/december

EREDETI TÉTELEK

A gasztrointesztinális fiziológia modulálása Lactobacillus casei és Bifidobacterium bifidum probiotikus törzsekkel

A gasztrointesztinális fiziológia modulálása a Lactobacillus casei és a Bifidobacterium bifidum probiotikus törzsein keresztül

J. Barrenetxe 1, P. Aranguren 1, A. Grijalba 2, J.M. Martennez-Peñuela 3, F. március 1. és E. Urdaneta 1

1. Élettani és táplálkozási laboratórium. Természettudományi Tanszék. Navarrai Állami Egyetem. Pamplona.
2. Biokémiai Szolgálat. Navarra Kórház. Pamplona.
3. Kóros anatómiai szolgálat. Navarra Kórház. Pamplona.

Ezt a kutatási projektet a navarrai kormány egészségügyi osztályának Ortiz de Landzuri támogatásával finanszírozták.

Kulcsszavak. Probiotikus törzsek. Bél. SGLT1. PEPT1.

Kulcsszavak. Prebiotikus törzsek. Bél. SGLT1. PEPT1.

Bevezetés

Ezért a jelen munka célja annak vizsgálata, hogy az egyes probiotikumokkal kiegészített étrendek bevitele (L. casei vagy B. bifidum) hatással van az állatok fejlődésére és különösen a bélműködésre, különösen az immunrendszerre, az emésztésre és a felszívódásra. Ezek az eredmények meghatározóak lesznek annak érdekében, hogy ezeket a mikroorganizmusokat később terápiában alkalmazzák különféle kóros helyzetekben.

A baktériumtörzsek megszerzése és növesztése

Állatok és diéták

28 napos svájci egereket (Charles River Laboratory Animals, Barcelona) és 20 g kezdeti testsúlyt véletlenszerűen elosztottunk a három kísérleti csoportban (n = 30-20): kontroll (C), Bifidobacterium bifidum (Zenekar Lactobacillus casei (L). Ketrecekben (n = 5) állandó hőmérsékletű (22 ± 2 ° C) és páratartalmú helyiségben, 12 órás világos és 12 órás sötét fényű ellenőrzött periódus alatt helyezték el őket.

Szövettani elemzés

A szövettani vizsgálathoz összegyűjtött vastagbélmintákat azonnal rögzítettük 4% -os formalinban 24 órán át. Ezután dehidratálták, és paraffinba való felvételüket követően 5 mm-es darabokra vágták és hematoxilin-eozinba festették a későbbi mikroszkópos elemzés céljából.

Az egér belének VMBC megszerzése

A nyálkahártyát 100 mM mannitot és 2 mM N-2-hidroxi-etil-piperazin-NV'-2-etánszulfonsavat (HEPES) tartalmazó táptalajban szuszpendáltuk 7,1 pH-értéken, Tris-hidroxi-metil-amino-metánnal. A szuszpenziót Potter-Elvehjem homogenizátorban (Braun, Melsungen, Németország) homogenizáltuk 3000 fordulat/perc sebességgel 4 ° C-on 1 percig. Ezután MgCl2-t adtunk 10 mM végkoncentrációig, és az elegyet 20 percig inkubáltuk hideg és folyamatos keverés közben. Ezt követően 2000 x g sebességgel 15 percig centrifugáltuk, a felülúszót összegyűjtöttük és 27 000 x g sebességgel 30 percig centrifugáltuk. Az így kapott pelletet 100 mM mannit, 0,1 mM magnézium-szulfát és 2 mM HEPES képződött táptalajban szuszpendáltuk pH = 7,4 mellett Tris-szel.

Végül az elegyet 27 000 x g sebességgel 30 percig centrifugáltuk, és az üledéket 300 mM mannitot, 0,1 mM magnézium-szulfátot és 10 mM HEPES-t tartalmazó táptalajban szuszpendáltuk pH = 7,4 mellett Tris-szel.

Az így kapott szuszpenzióból vett mintát használtuk fel a jelenlévő fehérje mennyiségének Bradford általi meghatározásához és a szacharáz aktivitás (EC3.2.1.48) méréséhez annak ellenőrzésére, hogy az apikális membránban dúsul-e. ötször kell összehasonlítani a kezdeti homogenizátummal.

Enzimaktivitás

Szubsztrátfelvételi vizsgálatok

A D-galaktóz felvételét 37 ° C hőmérsékleten, nátrium gradiens jelenlétében határoztuk meg. A pH 7,4-nél alkalmazott inkubációs közeg 0,1 mM D-galaktózt, 100 mM NaSCN-t, 100 mM mannitot, 0,1 mM MgSO4-et, 10 mM HEPES-t és a nyomjelzőként használt radioaktív szubsztrátot tartalmazott (1 mCi/ml D- [1-14 C ] galaktóz; Amersham Radiokémiai Központ, Egyesült Királyság).

A fehérje expressziójának elemzése Western blot alkalmazásával

A PEPT1 és SGLT1 transzporterek expresszióját a különböző kísérleti csoportok VMBC-jében Western-blot segítségével mértük. A mintákat 50 mM Tris-HCl (pH 6,8), 2% SDS, 10% glicerin, 5% 2-merkaptoetanol és 0,05% bróm-fenol-kék színű közegben hígítottuk. Három percig forraljuk, majd 50 ug-ot 12% -os poliakrilamid-gélre töltünk és 60 percig elektroforézissel elválasztjuk. Az így elválasztott fehérjéket elektroforézissel 250 mA/100 V és 4 ° C hőmérsékleten 2 órán át nitrocellulóz membránra (Hybond P., Amersham? Pharmacia Biotech, Barcelona) vittük át.

Statisztikai analízis

Az eredményeket a ± ESM átlagértékként fejezzük ki. A statisztikai elemzéshez az SPSS programot (12.0 verzió) és a Kruskal Wallis tesztet alkalmaztuk a megfelelő összehasonlításokkal a posteriori. A csoportok közötti különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük, amikor a p

Az állatok fejlődése

Mindkét probiotikus törzs felvétele az állatok szokásos étrendjébe nem változtatja meg testtömegüket, ami azt jelzi, hogy nem gyakorol káros hatást ezen állatok fejlődésére. Ezenkívül nem tapasztaltunk különbséget a mért vérparaméterekben vagy a kivont különböző szervek (jejunum, máj, lép, hasnyálmirigy és vastagbél) súlyában.

Ezért arra következtethetünk, hogy a Lactobacillus casei Y Bifidobacterium bifidum nem módosítja ezen állatok normális növekedését és fejlődését, sem anyagcseréjük állapotát.

A bél morfológiája

Ezek a tények azt mutatják, hogy mindkét törzs aktiváló hatást gyakorolhat a bél immunrendszerére.

Tápanyagok felvétele és enzimatikus aktivitása a VMBC-ben

Elemeztük a kiegészített étrendek ezen állatok bélfiziológiájára gyakorolt hatását. Amint a 3. ábrán látható, az összes elvégzett enzimatikus tesztben (szacharáz, maltáz és aminopeptidáz N) ezek az aktivitások megnövekedtek. A maltáz és az aminopeptidáz N aktivitás esetén ez a növekedés egyértelműbb a táplált csoportban Bifidobacterium hogy a táplálékban Lactobacillus.