A Mir-146a-5p elnyomja a májcsillagsejtek aktivációját és szaporodását a

mir-146a-5p

  • Tárgyak
  • Összegzés
  • Bevezetés
  • Eredmények
  • A máj miRNS-ek differenciális expressziója fibrózisos steatohepatitisben szenvedő egerekben
  • Microarray-alapú gén ontológiai elemzés és útvonal-elemzés differenciálisan expresszált miRNS-ekhez
  • A miRNS expressziójának validálása kvantitatív valós idejű PCR-rel (qRT-PCR)
  • Az miR-146a-5p-t alacsonyan szabályozták az aktivált HSC-kben in vitro
  • A MiR-146a-5p túlexpresszió elnyomta a HSC proliferációt
  • A miR-146a-4p hatása a HSC aktiválására és a kollagén lerakódására
  • Az miR-146a-5p közvetlenül a Wnt1 és Wnt5a mRNS 3'UTR-jére hatott
  • Az miR-146a-5p negatívan szabályozza a Wnt1 és Wnt5a szintet a poszttranszkripciós szinten
  • A miR-146a-5p túlzott expressziójának és gátlásának hatása a célgénekre a Wnt jelátviteli útvonal után
  • A Wnt1 vagy Wnt5a csökkenése gátolta a downstream Wnt szignalizáció és fibrogenezis gén expresszióját
  • Vita
  • Mód
  • Alkoholmentes szálas steatohepatitis állatmodelljei
  • Szövettani és biokémiai elemzés.
  • MicroRNS Microarray Assay
  • QRT-PCR elemzés
  • A potenciális miRNS-célok azonosítása
  • A HSC-k izolálása, tenyésztése és azonosítása
  • MiR-146a-5p transzfekció HSC-be
  • RNS interferencia és transzfekció
  • Immunocitokémiai elemzés.
  • Sejtproliferációs vizsgálat
  • Western Blot elemzés
  • Luciferáz aktivitás vizsgálata
  • statisztikai elemzés
  • további információ
  • Kiegészítő információk
  • PDF fájlok
  • Kiegészítő információk
  • Hozzászólások

Tárgyak

  • Májfibrózis
  • Alkoholmentes zsírmájbetegség

Összegzés

Bevezetés

Az alkoholmentes steatohepatitis (NASH) a nem alkoholos zsírmájbetegség (NAFLD) része, amelyet steatosis, lobularis gyulladás és progresszív pericelluláris fibrózis jellemez. Hosszan tartó májkárosodás esetén a steatohepatitis májfibrózissá válhat, amelyet az extracelluláris mátrix (ECM) túlzott felhalmozódása jellemez. A májstellátum sejtek (HSC) központi szerepet játszanak a májfibrózis 2 patogenezisében. Az inaktív HSC-k a krónikus steatohepatitis 3 hatására aktiválódhatnak. Az aktivált HSC-k serkentik a kollagéntermelést és az ECM felhalmozódását, ami a májfibrózis megjelenését eredményezi 4. A fibrózisos alkoholmentes steatohepatitis patofiziológiájának megértésében elért alapvető eredmények ellenére a fibrogenezis mechanizmusai steatohepatitis jelenlétében továbbra is megfoghatatlanok.

Eredmények

A máj miRNS-ek differenciális expressziója fibrózisos steatohepatitisben szenvedő egerekben

Amint az 1. ábrán látható, az MCD diétával táplált egerek májszakaszai rendezetlen lebenyszerkezetet, makrosteatózist mutattak ki a 3. zónában, pont- vagy gócos hepatocyta nekrózist, gyulladásos beszivárgást és perisinusoidális fibrózist (1A. Ábra), amelyhez szignifikánsan magasabb szérum társult. ALT és AST szint (P kétszer) (1C. Ábra).

( NAK NEK ) A máj metszetének hisztopatológiai változásai az étrendet tápláló egerekben és az MCD kontrollja. Hematoxilin és eozin festett (felül) és Masson trichromatism festett (alul). ( ) Az MCD diéta hatása a szérum ALT és AST szintre. ( C ) Differenciálisan szabályozott miRNS-ek, a miRNS mikro-sugarak által azonosítva. ( D ) A mikroarray adatok validálása valós idejű RT-PCR segítségével. A vizsgálatokat három példányban hajtottuk végre minden RNS-minta esetében, és az egyes miRNS-ek relatív mennyiségét U6 snRNS-re normalizáltuk. Az értékek átlag ± SD, ** P

( NAK NEK ) GO kategória elemzés, az összes differenciálisan szabályozott miRNS előre jelzett célpontjain alapulva. A függőleges tengely a GO kategóriát, a vízszintes tengely pedig a GO dúsítást jelöli. ( ) Útelemzés differenciálisan szabályozott miRNS-ekhez. Csak a P jelzésű útvonalak jelennek meg

( NAK NEK ) Reprezentatív morfológiai képek és nyugvó és aktivált HSC-k immunszöveti kémiai festése a desmin és az α-SMA esetében (400 ×). ( ) a miR-146a-5p expresszióját valós idejű qRT-PCR-rel vizsgáltuk. Az értékek átlag ± SD, ** P # P

( NAK NEK ) Az LX-2 és HSC-T6 sejtek szaporodását jelző desmin festés csökken, ha a miR-146a-5p túlzottan expresszálódik. ( ) miR-146a-5p gátolta az LX-2 és HSC-T6 sejtek növekedését a CCK-8 vizsgálatokkal meghatározva. Az értékek átlag ± SD, * P

( NAK NEK, C ) a miR-146a-5p lehetséges kötőhelyei a Wnt1 és Wnt5a 3'UTR-jében. ( , D ) A HEK-293T sejteket a Wnt1 és Wnt5a vad típusú vagy mutáns 3'UTR formáját tartalmazó luciferáz riporter vektorral transzfektáltuk miR-146a-5p utánzások, utánzó kontroll, miR-146a-5p inhibitor és inhibitor kontroll jelenlétében, majd a transzfekció után 48 órával értékeltük a luciferáz riporter aktivitását. Az értékek átlag ± SD, * P # P # P ## P

( NAK NEK ) mRNS és fehérje szintek ( ) Mβ-diétán és kontrollon májat tápláló egerekben β-katenin, GSK-3β és NFAT5. ( C ) A HSC-T6-ot miR-146a-5p inhibitorral vagy inhibitor kontrollal, miR-146a-5p-vel utánoztuk vagy utánoztuk 48 órán keresztül. Az mRNS és a fehérje szintje ( D ) β-katenin, GSK-3β és NFAT5 analízist valós idejű RT-PCR-rel és Western-blot-analízissel végeztük. A Β-aktint használtuk terhelés kontrollként. Az értékek átlag ± SD, ** P