A Spitz nevi és a hagyományos (nem spitzoid) melanomák immunhisztokémiai profilja
Tárgyak
Összegzés
Fő
A Spitz nevus szerzett melanocita elváltozás, amely általában gyermekeknél és serdülőknél alakul ki, bár felnőtteknél nem ritka. Klasszikusan úgy gondolják, hogy jóindulatú és konzervatív módon irányítják. Sophie Spitz 1948-as leírása óta 1 diagnózisa azonban aggodalomra ad okot, mert nem mindig lehet egyértelműen diagnosztizálni a Spitz nevus melanomát.
Bár egyes jellemzőket szisztematikusan kiértékelnek a Spitz nevi és a melanoma megkülönböztetésére, a különböző kritériumok relatív fontosságának meghatározása során a különböző szakértők eltérhetnek: méret, forma, a csatlakozási fészkek körülírása, az epidermiszben felfelé terjedés, a szubkután felé történő kiterjesztés, eozinofil gömbök, mitotikus alakok és azok felszínes vagy mély elhelyezkedése a tumorban, óriássejtek, fekély jelenléte és a stroma változásai. 2, 3, 4, 5 Ezenkívül a legtöbb elváltozás nem mutat sok olyan hagyományos kritériumot, amelyet általában a tumor szövettani diagnózisához használnak, ami hangsúlyozza az objektív kritériumok hiányát az elváltozások biológiai viselkedésének előrejelzéséhez. 3, 6, 7 Egyes esetek Spitz nevi 1 áttétekként történő besorolása jól illusztrálja, hogy egyes Spitz nevusokat csak szövettani szempontok alapján lehet pontosan megkülönböztetni a melanomától. Ezért az „atípusos Spitz-tumor” diagnosztikai kifejezést olyan elváltozások leírására használják, amelyek eltérnek a Spitz nevi tipikus megjelenésétől és biológiai jelentőségük bizonytalan. 7
Mivel az elváltozások egy részének diagnosztizálása továbbra is nehéz, ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy rutin immunhisztokémiai módszerekkel értékelje egy nagy jelölőpanel expresszióját, hogy rendelkezésre álljon egy általánosan elérhető fehérjegyüttes a Spitz nevus és a nevus. Összehasonlítottuk a fehérje expressziós aláírásokat mind a tipikus Spitz nevomák, mind a vertikális növekedési fázisú melanomák sorozatában annak érdekében, hogy olyan hatékony eszközt hozzunk létre, amely lehetővé teszi a melanocita elváltozások biológiai viselkedésének előrejelzését. Az eredmények kilenc, differenciálisan expresszált markert tartalmaznak a Spitz nevomákban és melanómákban, amelyek hasznosak mindkét melanocita elváltozás differenciáldiagnózisában.
Anyagok és metódusok
Szövetminták és szövetmátrixok felépítése
Összesen 90 paraffinba helyezett és formalinnal rögzített mintát vizsgáltak a madridi Universitario 12 de Octubre kórház 1995 és 2005 között összegyűjtött archívumából. Huszonnyolc megfelelt a tipikus Spitz neveknek, összhangban a Az orsó- és/vagy epithelioid melanocitafészkek jellemzői, a 3. és 62. méretű nem spitzoid melanómák primer vertikális növekedési fázisban. A vertikális növekedési fázist előre meghatározott kritériumok szerint határoztuk meg: 8 az epidermisz összes daganatos fészke kisebb, mint legalább egy a dermiszben, a dermális tumorsejtek jelenléte 25 vagy annál több sejtet tartalmaz, és az aktivitás mitotikus az intradermális neoplasztikus sejtekben . A melanomában szenvedő betegeket standard kritériumok szerint kezelték: műtéti reszekció megfelelő margókkal. Adjuváns interferont vagy kemoterápiás terápiát alkalmaztak metasztatikus betegség esetén, ha klinikailag javallt.
A reprezentatív hematoxilin-eozinnal festett szakaszokat kiértékeltük a szerzők szövettani jellemzői alapján, és a blokkokat megfelelő szövet (legalább 1 mm vastag) 9 alapján választottuk ki a szövetmátrixok elkészítéséhez.
A Spitz nevi-t és még kettőt VGP-melanómákkal tartalmazó szöveti mikroarray-t összeállítottuk a fent leírtak szerint, 9 beleértve az elsődleges paraffin-blokkok erősen sejtes területeinek legalább két 1,5 mm átmérőjű öntvényét. Ezenkívül normál szöveteket (főleg reaktív nyirokcsomókat, mandulákat és bőrt) helyeztek a tömbökre belső kontrollként.
Immunhisztokémiai rendszer és pontozás.
Az immunhisztokémiai festést 3 µm-es szövetszelvényeken hajtottuk végre a szöveti mikroelektromos blokkokból, 22 különböző primer antitest felhasználásával biológiailag releváns fehérjék ellen (forrás és koncentráció az 1. táblázatban felsorolva). Az immundetektálást LSAB vagy Envision vizualizációs rendszerrel végeztük (mindkettő Dakocytomation cégtől, Glostrup, Dánia), diaminobenzidin-kromogént használva szubsztrátként. Valamennyi szakaszt ellenárammal festettük hematoxilinnel (DAKO).
Teljes méretű asztal
Negatív kontrollokat kaptunk az elsődleges antitest kihagyásával. Az antitestek küszöbszelekcióját és belső kontrollját korábban meghatároztuk, hogy megkönnyítsük a módszer reprodukálhatóságát a publikált irodalom szerint 9 (lásd 1. táblázat). Az összes esetet két patológus függetlenül értékelte, és pozitívként rögzítették, figyelembe véve a fehérje expresszióját a neoplasztikus sejtekben és az egyes markerek specifikus vágását. A pozitív sejtek százalékos arányának esetleges eltéréseit a metszetek egyidejű újraértékelésével oldották meg.
Statisztikai elemzés
Fisher pontos tesztjét használták annak felmérésére, hogy egy adott fehérje expresszió társult-e egy adott elváltozással, legyen az Spitz nevus vagy melanoma. A többszörös tesztek hatásának elkerülése érdekében statisztikai szignifikanciát vontunk le a p 10 értékekre. A klinikai és hisztopatológiai adatokat az összes statisztikai vizsgálat elvégzése után állítottuk össze (2. táblázat).
Teljes méretű asztal
Eredmények
Klinikai és hisztopatológiai jellemzők.
A sorozat 90 betegből áll (52% nő és 48% férfi) 3 és 91 év között. A Spitz nevi és a melanoma betegek átlagéletkora 21,6, illetve 62 év volt. Az elváltozások helye 90 esetből 71-ben volt ismert (79%), ez volt a leggyakoribb végtag a Spitz nevi esetében (46%), a törzs pedig a melanomák esetében (31%). A Spitz nevi betegek mindegyike életben volt metasztázis nélkül, míg a vertikálisan növekvő melanomák 56% -ában (62-ből 35) metasztázis alakult ki, és 34% -uk (62-ből 21) meghalt.