A szabad prolin mennyiségi meghatározása a meliponícola szarvasmarhák étrendjében Matanzas és
1 Legelők és takarmányok kísérleti állomása Indio Hatuey, Matanzasi Egyetem, Felsőoktatási Minisztérium. Közép-España Republicana, CP 44280, Matanzas, Kuba.
2 Gyógyszerésztudományi Kar, Táplálkozási és Bromatológiai Tanszék, Salamancai Egyetem, Spanyolország.
3 Növénytani és Növényélettani Tanszék, Salamancai Egyetem, Spanyolország
Kulcsszavak: aminosavak; édesem; pollen.
Kulcsszavak: aminosavak; édesem; pollen
Kubában a meliponícola szarvasmarhák az összes kezelt kaptárból állnak, amelyek a Melipona beecheii Bennett, 1831 fajhoz tartoznak (Apidae: Meliponini), bejegyezve vagy nem (Lóriga, 2015). Mint minden más állományban, létfontosságú az állatok egészségének megőrzése az immunrendszer által biztosított (kollektív és egyéni) védekező mechanizmusok segítségével.
A méheknél ez a rendszer sejtes és humorális komponensekből áll (Bulet et al., 1999). A sejtes védekező mechanizmusokat a hemociták közvetítik, amelyek a hemolimfában helyezkednek el, és különösen részt vesznek a fagocitózisban és a kapszulázásban (Chapman, 2013). A humorális válasz magában foglalja az antimikrobiális peptidek szintézisét, amelyek baktériumok, gombák és paraziták által okozott fertőzésekre reagálva hatnak (Gätschenberger et al., 2013).
Gutiérrez és Orduz (2003) szerint a legtöbbet vizsgált antimikrobiális peptidek közé tartozik a méhek hemolimfájában található abaecin, amely 34 és 39 aminosav között áll. Az aminosavak közül kiemelkedő prolin markáns antimikrobiális aktivitást mutat a gram-pozitív és a gram-negatív baktériumok ellen.
A működéshez a biológiai rendszereknek olyan táplálkozási elemekre van szükségük, amelyek az étrenden keresztül szállított élelmiszerekből származnak. A méhekben ezek főleg a virágpornak és a nektárnak felelnek meg (Brodschneider és Crailsheim, 2010). Mindkettő létfontosságú e rovarok immunrendszere szempontjából (Di Pasquale et al., 2013).
A fentiek alapján, mivel ezen aminosav hozzájárul a méhek étrendjében az immunrendszerük megfelelő működéséhez, ennek a munkának az volt a célja, hogy meghatározza az elfogyasztott élelmiszerekben (pollen és méz) jelen lévő szabad prolin mennyiségét. ) meliponícola szarvasmarhákkal Matanzas és Mayabeque tartományokban.
Anyagok és metódusok
Elhelyezkedés. A vizsgálatot két meliponárióban végezték. Az egyik Pastorita, Matanzas község területén, Matanzas tartományban található, a másik pedig a San Nicolás község északi néptanácsa területén található, Mayabeque-ben.
Minták Véletlenszerűen 10 csalánkiütést választottak ki, mindegyik esetben ötöt. Mayabeque-ben 14, 2, 48, 5 és 6 csalánkiütést választottak ki, Matanzasban 1, 9, 11, 12 és 13 csalánkiütést választottak ki. Mindegyik kaptárban 60 g meliponícola virágpor és 80 ml méz. A mintavételeket 2018 áprilisában hajtották végre.
Kalibrációs görbe. Különböző koncentrációjú prolin standardok alkalmazásával állapítottuk meg, ugyanazon eljárásnak vetették alá a mintáknál. A kalibrációs görbét a standardok abszorbancia adataival dolgoztuk ki a prolin különböző koncentrációiból, és megtaláltuk a kalibrációs vonal egyenletét.
A szabad prolin meghatározása a mézben. 2,5 g homogenizált mézet lemértünk 0,1 mg pontossággal. A mágneses keverővel vízben feloldjuk őket. Ezután egy 5 ml-es mérőlombikba helyezzük őket, és az oldatot a jelig töltjük. Ezt követően 0,5 ml-t vettünk és 0,25 ml 98% -os hangyasavat (H-COOH) a PROLABO laboratóriumi anyagok szállítójától és 1 ml 3% -os ninhidrin-oldatot adtunk hozzá. Hasonlóképpen elkészítettünk egy vakot, amelyben a munkaoldatot 0,5 ml desztillált vízzel helyettesítettük. Ezt követően a csöveket lezártuk, rázattuk és 15 percig forrásban lévő vízfürdőben tartottuk. Miután ez a folyamat befejeződött, eltávolítottuk őket a forró vízből, és 5 percig hagytuk szobahőmérsékletre hűlni. Hozzáadunk 5 ml izopropanol-víz oldatot, és erőteljesen keverjük. Végül az abszorbanciát 517 nm-en mértük a vakpróbához képest, amelyet szintén a lehűtést követő 35 percben kezeltünk.
Számítások és az eredmények kifejezése. Ha C a kalibrációs görbéből kapott µg/ml prolin, és P (g) az elemzett mintában felhasznált méz tömege, akkor szükséges:
mg/kg méz = 5C/P
A prolin meghatározása a pollenben. A szabad aminosavakat kivontuk. Ehhez 0,25 g meliponícola pollent lemértünk körülbelül 0,1 mg pontossággal, és 25 ml 80% -os etanolt adtunk hozzá. Ezt követően 30 másodpercig az oldatot felbontottuk a szonikátorral. Ezután 15 percig keverés közben tartottuk őket, majd folytattuk a centrifugálást (5 perc 10 000 fordulat/perc sebességnél) és a felülúszó dekantálását. Ezt az extrakciós eljárást még kétszer hajtjuk végre a csapadékon. A kapott etanolos extraktumot rotációs bepárlón szárítottuk, 40 ° C-nál magasabb hőmérsékleten. Ezt követően a maradékot ultratiszta vízben szuszpendáljuk és 25 ml-re töltjük. Szűréséhez 0,45 mikronos millipore szűrőket használtunk. Végül 0,5 ml szűrletet vettünk, és a mézben végzett meghatározás szerint folytattuk.