A tlr2 aktivitás blokkolása csökkenti és stabilizálja az előrehaladott érelmeszesedést

stabilizálja

  • Összegzés
  • Cél:
  • Mód:
  • Eredmények:
  • Következtetés:
  • Bevezetés
  • Anyagok és metódusok
  • Állatok és kísérleti tervezés.
  • A szövetek összegyűjtése és feldolgozása.
  • Biokémiai elemzés
  • Szövettani és immunhisztokémiai festés.
  • TdT által közvetített nikkel dUTP jelölési vizsgálatok in situ
  • Western blotok
  • statisztikai elemzés
  • Eredmények
  • A TLR2 aktivitás blokkolása csökkenti és stabilizálja a brachiocephalic artéria ateroszklerotikus elváltozásait
  • A TLR2 blokád gyengíti az érelmeszesedéses artériák gyulladását
  • A TLR2 blokád csökkenti a makrofág apoptózist és a CHOP expressziót előrehaladott ateroszklerotikus elváltozásokban
  • A TLR2 közvetíti a felgyorsult ateroszklerotikus képződést, és szabályozza a CHOP expressziót és az apoptózist ApoE-hiányos egerekben, amelyek HC-diétával táplálkoznak
  • Vita
  • Szerző hozzájárulás

Összegzés

Cél:

A Toll-szerű receptor 2 (TLR2) szignalizáció kritikus szerepet játszik az érelmeszesedés megindulásában. A tanulmány célja annak megvizsgálása volt, hogy a TLR2 aktivitás blokkolása terápiás hatást fejthet-e ki előrehaladott érelmeszesedésre.

Mód:

Negyven hetes korban az apolipoprotein E (ApoE -/-) hiányos egereket normál étrenddel etették intravénásán TLR2 semlegesítő antitesttel vagy izotípus kompatibilis IgG-vel 18 héten keresztül. ApoE -/- Tlr2 -/- kettős találatú egereket vettünk pozitív kontrollként. A kezelések végén megmértük a plazma lipidszintjét és elemeztük a plakk morfológiáját, a gyulladásgátló citokin expressziót és az artériák apoptózisát. A vizsgálat második részében a 6 hetes ApoE -/- és ApoE -/- Tlr2 -/- egerek 12–24 hétig magas koleszterintartalmú étrendet fogyasztottak, a TLR2 és az apoptotikus markerek expressziós szintje az artériákban megvizsgálták.

Eredmények:

A TLR2 aktivitás blokkolása a TLR2 semlegesítő antitesttel vagy a Tlr2 gén inaktiválása nem változtatta meg az ApoE// - egerek plazma lipidszintjét. A farmakológiai és genetikai manipulációk azonban jelentősen csökkentették a lepedék méretét és az erek szűkületét, és megnövelték a plakk stabilitását a brachiocephalicus artériákban. A TLR2 antagonizmus védőhatásai az IL-6 és TNF-α gyulladásgátló citokinek elnyomott expressziójával és az NF-κB és Stat3 transzkripciós faktorok inaktiválásával társultak. Ezenkívül a TLR2 aktivitás blokkolása gyengíti az ER stressz által kiváltott makrofág apoptózist a brachiocephalic artériákban, ami elősegítheti a nekrotikus magok feloldódását előrehaladott érelmeszesedésben. Továbbá a magas koleszterinszintű étrend hangsúlyosabban felgyorsította az ateroszklerotikus képződést és fokozta a pro-apoptotikus CHOP fehérje expressziót és apoptózist ApoE -/- egerekben, mint ApoE -/- Tlr2 -/egerekben - .

Következtetés:

A TLR2 aktivitás farmakológiai vagy genetikai blokkolása csökkenti és stabilizálja az előrehaladott érelmeszesedést az ApoE -/- egerekben. Ezért a TLR2 jelátvitel megcélzása ígéretes terápiás stratégia lehet az előrehaladott érelmeszesedés ellen.

Bevezetés

Az érelmeszesedés a szív- és érrendszeri betegségek gyakori oka. A szív- és érrendszeri betegségek a legfőbb halálokok, és az egész világon egyre nagyobb veszélyt jelentenek az emberi egészségre 1. Az epidemiológiai és kísérleti vizsgálatok meghatározták a gyulladás túlsúlyát az érelmeszesedés minden szakaszában, a korai stabil ateroszklerotikus plakkok kialakulásától a fejlett plakkokig, amelyek hajlamosak a 2, 3, 4, 5 repedésre. A közelmúltban számos tanulmány foglalkozott a farmakológiai beavatkozásoknak a fejlett plakkok stabilitására gyakorolt ​​hatásával, mivel az instabil elváltozások megrepedése hozzájárul az akut koronária szindrómához 4, 6, 7. Az instabil plakkokat nagy lipiddel töltött nekrotikus magok jellemzik, amelyeket vékony rostos réteg zár be, magas szintű gyulladásgátló mediátorok és mátrix proteázok, valamint apoptózis. Az instabil plakkok kialakulása összefügg a veleszületett és adaptív immunrendszer részvételével.

Az autópálya-szerű receptorok (TLR) a mintázatfelismerő receptorok családja, amelyek kulcsszerepet játszanak a veleszületett immunitásban és gyulladásos reakciókat indítanak el. Ezen receptorok ligálása megindítja a κB (NF-κB) nukleáris faktor aktiválódását, ami a gyulladásos gének 8, 9 széles körének expresszióját eredményezi. A jellemzett TLR-ek közül a TLR2 egyedülálló, mivel képes TLR1-gyel vagy TLR6-tal heterodimerizálni, ami viszonylag széles ligandusspecifitást eredményez, amely magában foglalja mind az endogén, mind az exogén ligandumokat. Figyelemre méltó, hogy az összes potenciális endogén TLR2 agonista, beleértve a biglikán, a nagy mobilitású kromoszomális box fehérje 1 (HMGB1) és az oxidált lipoprotein komponenseket, megtalálható a 12., 13., 14. érelmeszesedésben. Ezenkívül a TLR2 jelátviteli út társul az endoplazmatikus retikulum (ER) stresszválaszához. Az ER stressz növelheti a TLR2 expressziót in vitro és in vivo, és a TLR2 hozzájárul az apoptózishoz azokban a makrofágokban, amelyek lipid által kiváltott ER stresszen mennek keresztül. Ezért a TLR2 potenciális célpont lehet az érelmeszesedés kezelésében alkalmazott terápiás beavatkozások során.

Anyagok és metódusok

Állatok és kísérleti tervezés.

Az ApoE -/- Tlr2 -/- egereket ApoE -/- egerek (C57BL/6 háttér, Jackson Laboratory) és Tlr2 -/- egerek (C57BL/6 háttér, Jackson Laboratory) heterozigóta keresztezéséből állítottuk elő. A homozigóta kettős knockout vagy ApoE egyszeres knockout egerek genotípusait PCR-rel igazoltuk, amint azt korábban leírtuk 18. Valamennyi állatot normál páratartalom, szobahőmérséklet és sötét fény ciklusban helyezték el, a vízhez és az élelemhez tetszés szerint hozzáférhettek. A vizsgálatokat az állatgyógyászati ​​és állatgyógyászati ​​kutatások etikai intézményi bizottsága (Peking, Kína) által felvázolt elveknek megfelelően végezték.

A szövetek összegyűjtése és feldolgozása.

Miután az egerek 4 órán át éheztek, a retorbitális vénás plexuson keresztül vért nyertünk a lipidméréshez. Ezután az egereket 50 mg/kg ip pentobarbitál alkalmazásával altattuk, és a bal szívkamrán keresztül fiziológiás nyomáson jéghideg foszfáttal pufferolt sóoldattal perfundáltuk. Az aortákat gyorsan kivágtuk, az aortaívtől a csípő elágazásáig lefagyasztottuk, és a fehérje elemzése előtt -80 ° C-on tartottuk. Minden állat teljes brachiocephalikus artériáját 4% paraformaldehidben rögzítettük 24 órán át 4 ° C-on, paraffinba ágyazva és sorozatosan (5 μm vastagságban) metszettük.