A törzs fehérje profiljának jellemzése

Granadai Egyetem Biotechnológiai Intézet Irányított kutatómunka a cím megszerzéséhez: Master in Biotechnology A Bacillus pumilus entomopatogén törzsének fehérje profiljának jellemzése. Diana Carolina García Ramón 2011. július

törzs

Granadai Egyetem Biotechnológiai Intézet Irányított kutatómunka a cím megszerzéséhez: Biotechnológiai mester A Bacillus pumilus entomopatogén törzsének fehérje profiljának jellemzése. Diana Carolina García Ramón 2011. július Oktató: Társoktató: Dra. Susana Vílchez Tornero Felvett professzor Orvos Biokémiai Tanszék Granadai Biotechnológiai Intézet Dr. Antonio Osuna Carrillo de Albornoz professzor Granadai Egyetem Parazitológiai Tanszék Granadai Egyetem

E kutatási munka egy részét az IOBC/WPRS munkacsoportok kongresszusának 13. európai találkozóján mutattuk be szóbeli előadással, melynek címe: A Bacillus pumilus 15.1 toxicitásának megértése a mediterrán gyümölcslégy (Ceratitis capitata) felé. Helyszín: Innsbruck Austria Dátum: 2011. június 19–23

MUTATÓI KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS. I MUTATÓ. V. ÖSSZEFOGLALÓ. 1 RÖVIDÍTÉSEK. 5 1. BEVEZETÉS. 9 1.1 Entomopatogén mikroorganizmusok. 11 1.2 Entomopatogén baktériumok. 13 1.2.1 A Bacillus nemzetség. 14 1.2.2 Bacillus thuringiensis. 15 1.2.2.1 Virulencia tényezők: Cry és Cyt toxinok. 17 1.2.2.2 Egyéb virulencia faktorok. 19 1.2.2.3 Biotechnológiai alkalmazások. 21 1.3 Bacillus pumilus. 22 1.3.1 Biológia. 22 1.3.2 Biotechnológiai alkalmazások. 24 1.3.2.1. Enzimtermelés. 24 1.3.2.2 Antibiotikumok előállítása. 26 1.3.2.3 Biológiai ellenőrzés. 27 1.3.2.3.1. A gombák és baktériumok védelme a növényekben. 27 1.3.2.3.2 Rovarirtás. 30 1.3.2.4 Egyéb alkalmazások. 32 1.4 Bacillus pumilus 15.1. 32 2. CÉLOK. 37 3. ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK. 43 3.1 Baktériumtörzsek tenyésztési körülményei. 45 3.1.1 Baktériumtörzsek és megőrzésük. 45 3.1.2 Táptalajok. 46 3.1.2.1 Gazdag közeg. 46 3.1.2.2 Sporulációs közeg. 46 3.1.3 Növekedési körülmények. 47 3.2 Fehérjeelemzés. 47 3.2.1 Fehérje minták kezelése. 47 3.2.2 Fehérje-elektroforézis. SDS-PAGE. 49 3.2.3 A fehérjék elválasztása szacharózgradienssel. 50 3.2.4 Mikroszkópia. 51 3.2.4.1. Optikai mikroszkópia. 51 3.2.4.2 Transzmissziós elektronmikroszkópia. 52 3.2.5 Immunblotok. 52 3.2.6 Fehérje szolubilizáció. 54.

3.2.7 A fehérjék elemzése és azonosítása a MALDI-TOF segítségével. 56 3.2.8 Biológiai vizsgálatok C. capitata-val. 56 3.2.8.1 A mediterrán gyümölcslégy telep fenntartása. 56 3.2.8.2. Lárvákkal végzett biológiai vizsgálatok. 58 4. EREDMÉNYEK. 63 4.1 A B. pumilus törzs fehérje profilja 15.1. 65 4.1.1 A vegetatív növény fehérje profilja. 66 4.1.2 Sporulált tenyészet fehérje profilja. 67 4.2 Fehérjeszeparáció szacharózgradiensekkel. 70 4.3 A B. pumilus 15.1 megfigyelése mikroszkóppal. 79 4.4 A B. pumilus 15.1 tenyészet frakcióinak elemzése Immunoblot alkalmazásával. 85 4.5 Fehérje oldhatóság. 88 4.6 A fehérjék azonosítása peptid lábnyomelemzéssel vagy ujjnyomással. 92 4.7 Az izolált fehérjék aktivitása szacharózgradiensekben a C. capitata lárvákkal szemben. 95 5. MEGBESZÉLÉS. 99 6. KÖVETKEZTETÉSEK. 109 7. JÖVŐBENI MUNKA. 115 8. BIBLIOGRÁFIA. 121 MELLÉKLETEK. 141 A fehérjék elemzése és azonosítása a MALDI-TOF segítségével. 143 37 kda fehérje. 143 Fehérje 17 kda. 144 Fehérje 45 kda. 145 Fehérje 60 kda. 146 Fehérje 250 kda. 147

RÖVIDÍTÉSEK (p/p) Súly/tömeg arány (p/v) Súly/térfogat arány (v/v) Térfogat/térfogat arány

Hozzávetőleges C fok Celsius µg Mikrogramm µl Mikro liter µm Mikrométer 16S Prokarióta riboszóma kisebb alegység rRNS molekula DNS Deoxiribonukleinsav APS Ammónium perszulfát RNS Ribonukleinsav rRNS riboszomális RNS ATP Adenozin trifoszfát Bturingin Bt protein Ct. Citolitfehérje Da Daltons DNSse Dezoxiribonukleáz DTT Ditriotreitol EDTA Etilén-diamin-tetraecetsav g Gramm H 2 O 2 Hidrogén-peroxid HCl Sósav K 2 MnO 4 Kálium-manganát kb Kilo bázisok 5