A zsírszövet szerkezetének feltárása metilszalicilát tisztítás és 3D képalkotási protokoll segítségével (lefordítva

Összegzés

Itt leírunk egy egyszerű, olcsó és gyors tisztítási módszert az emberi és egér fehér zsírszövet 3D-s szerkezetének feloldására markerek kombinációjával az érrendszer, az atommagok, az immunsejtek, az idegsejtek és a lipidcseppréteg-fehérjék fluoreszcens képek felhasználásával történő megjelenítésére.

metilszalicilát

Absztrakt

Bevezetés

Az elhízást a zsírszövet tömegének növekedése jellemzi, és világszerte jelentős közegészségügyi problémává vált, mivel az elhízott emberek fokozottan veszélyeztetettek a szív- és érrendszeri betegségek, a 2-es típusú cukorbetegség, a májbetegségek és a rák egyes típusainak kialakulásában.

A zsírszövet alapvető fiziológiai funkciója az egész test glükóz- és lipid homeosztázisának modulálása 1, 2. A táplálkozási időszak alatt az adipociták (vagyis a zsírszövet fő sejtjei) az étkezés által biztosított glükóz- és lipidfelesleget trigliceridekben tárolják. A koplalás során az adipociták a triglicerideket észteresítetlen zsírsavakká és glicerinné bontják, hogy fenntartsák a test energiaigényét. Az elhízás kialakulása során a zsírszövet kitágul, növelve az adipociták 1 méretét (hipertrófiája) és/vagy számát (hiperpláziája), hogy növelje annak tárolókapacitását. Amikor a zsírszövet expanziója eléri a határértéket, a betegek körében nagyon változó állandó, a fennmaradó lipidek felhalmozódnak más anyagcsere-szervekben, beleértve az izmokat és a májat 3, 4, ami funkcionális kudarcukhoz vezet, és ezzel összefüggő kardio-metabolikus komplikációkat indít el. 1, 5. Ezért kulcsfontosságú klinikai kihívás a zsírszövet tágulását szabályozó mechanizmusok azonosítása.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

Ezt a protokollt tesztelték és validálták az összes egérlerakódásra és az emberi fehér zsírszövetre. Az emberi és egér zsírszöveteket az európai törvényeknek megfelelően gyűjtötték össze, és a francia és a svéd etikai bizottság jóváhagyta.

1. Az egér és az emberi fehér zsírszövet rögzítése

2. Az egér és az emberi fehér zsírszövet permeabilizálása és telítettsége

3. Festési eljárás egér és emberi fehér zsírszövet esetében

4. Az egér és az emberi fehér zsírszövet tisztítási eljárása

5.3. Átlátszó fehér zsírszövet D-konfokális képalkotása

  1. Vigye át a szövetet egy üvegfenékkel ellátott fém képalkotó kamrába (lásd Anyagtáblázat)vegyi fedél alatt, és töltse fel a kamrát friss metil-szaliciláttal.
    MEGJEGYZÉS: Annak érdekében, hogy rögzítse a szövetet a helyén, és megakadályozza, hogy a kamrában lebegjen vagy oldalra mozduljon, helyezzen el több 18 mm-es kerek üveg fedőlemezt (lásd: Anyagtáblázat)a szövet tetején, ha a fényképezőgépre szerelik.
  2. Helyezze a képkamerát egy fordított konfokális mikroszkópra.
  3. Képezze le a szövetet kis nagyítású objektív segítségével (pl. 4x objektív), hogy néhány cm 3 -es 3D térképet készítsen az összes zsírszövetről vagy az emberi szövetmintáról.
  4. Válasszon több területet a szövetmintavételhez nagyobb nagyítással. Jellemzően használjon 20-szoros távolsági légobjektívet, amely jó felbontás-mélység arányt biztosít. Nagy mozaikképeket szerzünk, z-halmokkal 600 és 2000 m között.
    MEGJEGYZÉS: Használjon nagy távolságú lencsét a szövetbe.