Az ap1 faktor inaktiválása a suprabasalis epidermiszben az

suprabasalis

  • Tárgyak
  • Összegzés
  • Bevezetés
  • Eredmények
  • Az AP1 faktor suprabasalis inaktiválásának hatása az epidermális morfológiára
  • A TAM67 szuprabazális expressziója növeli az alapréteg keratinocitáinak proliferációját
  • A TAM67 suprabasalis expressziója blokkolja a tumor képződését
  • TAM67 kontra TPA: hasonló fenotípus
  • Vita
  • AP1 faktorok: kulcsfontosságú szerep a normális epidermiszben
  • Az AP1 faktor szuprabazális inaktiválásának hatása
  • Anyagok és metódusok
  • TAM67 transzgénikus egerek
  • Karcinogenitási vizsgálatok
  • Antitestek és immunológiai módszerek.
  • Szójegyzék

Tárgyak

  • Rák
  • Sejtszaporodás
  • Onkogenezis

Összegzés

Bevezetés

Feltételeztük, hogy az AP1 faktorok különböző funkciókat látnak el a bazális (proliferatív) versus suprabasalis (differenciáló) epidermiszben (Eckert et al., 2004). Ennek a hipotézisnek a tesztelését azonban bonyolítja az a tény, hogy az AP1 család gyakorlatilag minden tagja expresszálódik valamilyen szinten a bazális és suprabasalis rekeszekben (Welter és Eckert, 1995; Angel és mtsai, 2001; Mehic és mtsai. Al.) ., 2005). Az AP1 faktorok epidermális karcinogenezisben betöltött szerepének megértése érdekében Colburn és munkatársai a K14 promótert arra használták, hogy a TAM67 expresszióját a keratinociták alaprétegébe irányítsák (Young és mtsai, 1999). A TAM67 a c-jun domináns negatív formája, amely széleskörűen kölcsönhatásba lép az összes AP1 faktorral, hogy gátolja a transzaktivációt (Brown és mtsai., 1994). Ezekben az érdekes tanulmányokban az AP1 faktor inaktiválása az alaprétegben nem eredményezett nyilvánvaló változásokat a keratinocita proliferációjában vagy az epidermális vagy a bőr megjelenésében; az egerek azonban kevésbé voltak érzékenyek a rák progressziójára (Young és mtsai, 1999; Thompson és mtsai, 2002; Cooper és mtsai, 2003).

Jelen tanulmány egyik fontos célja az AP1 faktorok szerepének értékelése volt a suprabasalis epidermiszben. Ennek elérésére olyan egereket generáltunk, amelyekben a TAM67 a suprabasalis epidermális rétegekben expresszálódik. Olyan indukálható rendszert használunk, amely reverzibilisen lehetővé teszi a TAM67 expressziójának aktiválását a suprabasalis epidermiszben doxiciklin (Dox) ivóvízben történő beadásával. Kísérleteink azt mutatják, hogy a TAM67 szuprabazális expressziója megvastagodott, hiperproliferatív parakeratotikus epidermist eredményez, de ennek a kiterjedt hiperproliferációnak ellenére az epidermisz rezisztens a DMBA/TPA-függő tumor kialakulásával szemben.

Eredmények

Az AP1 faktor suprabasalis inaktiválásának hatása az epidermális morfológiára

Teljes méretű kép

A TAM67 szuprabazális expressziója növeli az alapréteg keratinocitáinak proliferációját

Az epidermális vastagság növekedése oka lehet a sejtek nagyobb túlélése a suprabasalis rétegekben, a sejtek nagyobb tapadása a rétegzett rétegekben, vagy a bazális sejtek nagyobb proliferációja. Először azt teszteltük, hogy az AP1 faktor szuprabazális inaktiválása befolyásolja-e a bazális keratinociták szaporodását. Ennek tesztelésére figyeljük a BrdU beépülését és a Ki67 szintet. A TAM67-et expresszáló egereket 2 órán át BrdU-val kezeltük, és szövetszelvényeket készítettünk a BrdU és Ki67 kimutatására. Amint a 2a. Ábra mutatja, a BrdU és Ki67 pozitív magok száma ötször nagyobb a TAM67 (+ Dox) pozitív epidermiszben, ami arra utal, hogy a bazális és suprabasalis réteg fokozott proliferációja hozzájárul a fenotípushoz.

Teljes méretű kép

A TAM67 szuprabazális expressziójának a sejtproliferációra és differenciálódásra gyakorolt ​​hatásának további értékeléséhez nyomon követtük az epidermális differenciálódási markerek expresszióját. A keratin K1, involucrin, filaggrin és loricrin jellemzően differenciált suprabasalis keratinocitákban expresszálódik (Eckert et al., 1997). A TAM67-pozitív epidermiszben a K1, az involucrin és a filaggrin normális suprabasalis expressziót mutat, ami arra utal, hogy a keratinocyták továbbra is differenciálódnak (2b. Ábra). Azonban a loricrint, amely normál esetben diszkrét sávként van jelen a felső hámrétegben, a TAM67-pozitív epidermiszben több suprabasalis rétegben diffúzan detektálják (2b. Ábra). Ezenkívül az AP1 faktor szuprabazális funkciójának hiánya az involucrin és a loricrin csökkent szintjével jár együtt (2c. Ábra); ami arra utal, hogy az AP1 faktor szuprabazális funkciója szükséges e gének expressziójának fenntartásához.

A K5 és K14 keratinok tipikusan bazális keratinocitákban expresszálódnak; azonban a TAM67 pozitív egerekben az expresszió mind a bazális, mind a suprabasalis rétegben megfigyelhető. Ezeknek a fehérjéknek a suprabasalis epidermiszben való jelenléte összhangban áll azzal az elképzeléssel, hogy a sejtek késik a differenciálódásban. Ezenkívül magas szintű keratin K6 expressziót észleltünk, amely keratin nem található meg a normál epidermiszben, de a hiperproliferatív epidermiszben (Sun és mtsai., 1983).