Ehrlichia canis látszólag egészséges lakóhelyű kutyáknál és kullancsoknál a

UNIVERSIDAD AGRARIA DE LA HABANA Állatorvostudományi Kar Fructuoso Rodríguez Pérez Ehrlichia canis látszólag egészséges lakóhellyel rendelkező kutyákban és négy nyugat-kubai önkormányzat kullancsában Tézisek az állatorvos-tudomány doktorának tudományos fokozatának lehetőségeként Szerző: DMV Maylín González Navarrete, M. Sc Mayabeque, 2018

canis

UNIVERSIDAD AGRARIA DE LA HABANA Állatorvos-tudományi Kar Fructuoso Rodríguez Pérez Ehrlichia canis látszólag egészséges lakóhelyű kutyákban és négy nyugat-kubai önkormányzat kullancsában Tézisek az állatorvos-tudomány doktorának tudományos fokozatának lehetőségeként Szerző: DMV Maylín González Navarrete, M. Sc oktatók: DMV Adivaldo Henrique Da Fonseca, Dr. C. DMV Eugenio Roque López, Dr. C. Tanácsadók: DMV María Antonia Abeledo García, Dr. C. Lic. Belkis Corona González, Dr. C. Mayabeque, 2018

Elkötelezettség Mindannyiunk számára, akinek megőrzési álma van, hogy megőrizze a természet és az állatok integritásának fenntartását. Mindannyiunknak, aki nem hagyja abba az álmodozást, a harcot, a nyomozást és mindig a legjobb módot keresi önmagunk megőrzésére. Az új generációknak, akiket kötelességünk tisztelni munkánkkal és útmutatásunkkal, minden nap jobban felkészülve, hogy példánk legyen a legjobb módja a tanításnak.

Táblázatindex 1. táblázat: A mintában szereplő települések felületi kiterjedése, népsűrűsége és kutyasűrűsége. 38 2. táblázat A kullancskeverékek mennyisége az egyes települések szakaszai szerint. 41 3. táblázat: Az E. canis beágyazott PCR-rel történő kimutatására használt primerek. 42 4. táblázat: Minden beágyazott PCR vizsgálat amplifikációs ütemezése (Murphy és mtsai., 1998). 5. táblázat: Az E. canis elleni IgG antitesttel rendelkező kutyák százalékos aránya életkor, fajták és nemek szerint. 56 6. táblázat: A minták alapján vett minták és kutyák száma önkormányzat szerint. A mintába vett házak megoszlása ​​a házankénti kutyák száma szerint. 60 7. táblázat: Az összegyűjtött kullancsok és a fertőzött kutyák száma önkormányzat szerint. 65 8. táblázat: A R. sanguineus s.l. fertőzés intenzitásának osztályozása. mintába vett kutyáknál. 70 9. táblázat: A kullancsok általi fertőzés mértéke R. sanguineus s.l. a vizsgált önkormányzatokban. 70 10. táblázat: A változók és a pozitivitás kapcsolata az E. canis-hoz beágyazott PCR-rel Kuba nyugati régiójának négy településén (egyváltozós logisztikai regresszió). 86 11. táblázat: Kuba nyugati régiójának négy településében beágyazott PCR-rel az E. canis iránti pozitivitással kapcsolatos kockázati tényezők. (Többváltozós logisztikai regresszió). 87

100 bp (Promega, Madison, USA); 2. és 3. sor: negatív kontroll; 4-15. Sor: kullancs DNS-keverékek, 16. vonal: pozitív kontroll. 77 15. ábra A mintában vett kutyák százalékos aránya korcsoportonként. 84.

Rövidítések, rövidítések és szimbólumok listája DNS: dezoxiribonukleinsav Ca Cl2: Kalcium-klorid dntps: dezoxiribonukleotid-trifoszfátok EDTA: etilén-diamin-tetraecetsav ELISAi: indirekt enzimatikus immunszorbens vizsgálat IFI: Indirekt immunfehér fény L: klorid Mg2: milligramm Mg klorid Mg milligramm Mg klorid ml: milliliter mm: millimoláris VAGY: szorzó arány pb: bázispárok PBST: foszfáttal pufferolt sóoldat (pH 7,2-7,4) 5% Tween 20 PBS-sel: foszfáttal pufferolt sóoldat PCR: polimeráz láncreakció ph: hidrogénionos potenciál pmol: pikomol rRNS: riboszomális ribonukleinsav fordulat/perc: fordulatok percenként TAE: Tris-Acetate-EDTA puffer Taq: A Thermus aquaticus U baktériumból izolált DNS-polimeráz enzim: V egység: volt µg: mikrogramm µl: mikroliter µm: mikromoláris 16S rrna: 16S riboszomális RNS: C védjegy: Celsius fokozat

ÁLTALÁNOS MUTATÓ BEVEZETÉS. 2 Hipotézis. 5 Általános cél. 5 Konkrét célok. 5 TUDOMÁNYOS NAGYSÁG ÉS HOZZÁJÁRULÁS. 7 I. FEJEZET BIBLIOGRÁFIAI FELÜLVIZSGÁLAT. 8 1.1. A kutya monocita ehrlichiosisának fogalma és története. 8 1.2. Etiológiai szer. 9 1.2.1. Az E. canis taxonómiája. 10 1.2.2. Morfológia. 10 1.3. A kutyák erlichiosisának epidemiológiája. 11 1.3.1. Az E. canis földrajzi elterjedése. 11 1.3.2. Vektorok. 12 1.3.3. Otthont ad. 19 1.3.4. Az E. canis terjedése. 20 1.3.5. Az E. canis fertőzéssel járó kockázati tényezők. 21 1.4. A kutyák erlichiosisának patogenezise. 23 1.4.1. Klinikai kép. 25 1.5. Az E. canis diagnózisa. 27 1.5.1. Vérkenet diagnosztizálása. 28 1.5.2. Sejtkultúra. 29 1.5.3. Szerológiai diagnózis. 30 1.5.4. Molekuláris diagnózis polimeráz láncreakcióval a gazdaszervezetben. 31 1.5.5. Molekuláris detektálás a vektorban. 32 1.5.6. Megkülönböztető diagnózis. 33 1.5.7. Többszörös fertőzés vagy társfertőzés. 33 1.6. A kutyák erlichiosisának megelőzése és ellenőrzése. 34 1.6.1. Megelőzés. 34 1.6.2. Az R. sanguineus kullancs ellenőrzése. 35 II. FEJEZET. ANYAGOK ÉS ÁLTALÁNOS MÓDSZEREK. 38

4.3.5. A R. sanguineus s.l. által fertőzött kutyákkal rendelkező házak azonosítása 71 4.2.4. Részleges következtetések. 73 V. FEJEZET Ehrlichia canis a vizsgált településeken mintavételezett kutyákból gyűjtött kullancsokban. 75 5.1. Bevezetés. 75 5.2. Anyagok és metódusok. 76 5.2.1. A kullancsok gyűjtése és megőrzése. 76 5.2.2. Beágyazott PCR-vizsgálat. 76 5.2.3. Az amplifikált fragmensek szekvenálása és elemzése. 76 5.3. Eredmények és vita. 76 5.4. Részleges következtetés. VI. FEJEZET Az Ehrlichia canis kockázati tényezői látszólag egészséges kutyáknál, akiknek a lakóhelye Habana del Este, Boyeros, Cotorro és San José de las Lajas önkormányzatok. 81 6.1. Bevezetés. 81 6.2. Anyagok és metódusok. 82 6.2.1. A mintában szereplő populáció jellemzése. 82 6.2.2. Epidemiológiai kérdőív. 82 6.2.3. Statisztikai elemzés. 83 6.3. Eredmények és vita. 83 6.3.1. A mintában szereplő kutyapopuláció jellemzése. 83 6.3.2. A kockázati tényezők elemzése. 85 6.4. Részleges következtetés. 91 VII. FEJEZET. Általános vita. 92 VIII. ÁLTALÁNOS KÖVETKEZTETÉSEK. 98 IX. AJÁNLÁSOK. 100 X. BIBLIOGRÁFIAI HIVATKOZÁSOK. 1 IX. MELLÉKLETEK. 1

Bevezetés 4. Határozza meg az E. canis fertőzés kockázati tényezőit a látszólag egészséges lakóhelyű kutyákban a vizsgált településeken. 6.