Gátolja; n aneurizmák kísérleti növekedése a; hasi armatika szivaccsal

Tekintse meg az e médiumban megjelent cikkeket és tartalmakat, valamint a tudományos folyóiratok e-összefoglalóit a megjelenés idején

Figyelmeztetéseknek és híreknek köszönhetően mindig tájékozott maradjon

Hozzáférhet exkluzív promóciókhoz az előfizetéseken, az indításokon és az akkreditált tanfolyamokon

Kövess minket:

  • Bevezetés
  • Anyagok és metódusok
  • Eredmények
  • Vita
  • Bevezetés
  • Anyagok és metódusok
  • Ebhg készítése bfgf-vel vagy anélkül
  • Kísérleti állatok
  • Kísérleti aaa indukciója
  • Kezelési csoportok
  • Szövettani elemzés
  • Statisztikai elemzés
  • Eredmények
  • A nap változásai az 5 csoportban
  • Szövettani elemzés
  • Vita
  • Bibliográfia

aneurizmák

A hasi aorta aneurizma (AAA) gyakori és életveszélyes rendellenesség, amelyet az aortafal extracelluláris mátrixának roncsolása és szintézise közötti egyensúlyhiány jellemez. Az aneurysma kialakulása krónikus transzmurális gyulladással, a simaizomsejtek (SMC) populáció kimerülésével és a metalloproteináz mátrix (MMP) túlzott termelésével jár, ami az elasztin és az 1, kettő kollagén rendellenes lebomlását okozza. Az AAA standard kezelése a vaszkuláris implantátumok elhelyezésével végzett műtéti korrekció, valamint az aneurysma endovaszkuláris helyreállítása, mindez azzal a céllal, hogy megakadályozza az AAA halálos repedését. Az aneurysma patológia stabilizálására és a további terjeszkedés vagy repedés megakadályozására azonban még mindig nincs hatékony orvosi kezelés.

Az itt leírt vizsgálatban patkányokat kísérleti AAA-val kezeltünk zselatin-hidrogél (EBHG) vagy beépített bFGF-et tartalmazó EBHG-vel, hogy megvizsgáljuk ezeknek a kezeléseknek a kísérleti AAA progressziójára gyakorolt ​​hatását.

Anyagok és módszerek EBHG előállítása bFGF-vel vagy anélkül

Rekombináns humán bFGF-et 9,6 izoelektromos ponttal szállított a Kaken Pharmaceutical (Tokió, Japán). Az EBHG-t a korábban leírt módon állítottuk elő13. Az EBHG-t savzselatin 4,9 izoelektromos ponttal való keresztkötésével készítettük. Lemezbe öntötték (15 x 7 x 2 mm) és liofilizálták. Mielőtt az EBHG-t az aortára helyeztük, a liofilizált EBHG-t vizes oldattal bFGF-fel vagy anélkül 1 órán át áztattuk, így EBHG-t kaptunk bFGF-el vagy anélkül. Ezt a zselatin szivacslapot 2 hét alatt tervezték lebomlani.

Kísérleti állatok

Hím Sprague-Dawley patkányokat (250-400 g) kaptunk a CLEA-tól (Tokió, Japán), és felhasználtuk a kísérletekhez. Ezt a vizsgálatot a Tohoku Egyetem Orvostudományi Doktori Iskolájának Állatgondozási Bizottsága engedélyezte. Az állatok gondozása megfelelt a Laboratóriumi állatok gondozására és használatára vonatkozó útmutató (National Research Council, Washington DC, 1996) rendelkezéseinek.

Kísérleti AAA kiváltása

A patkányokat i.p. injekcióval altattuk. nátrium-pentobarbitált (50-60 mg/testtömeg-kg: Dainippon Pharmaceutical, Osaka, Japán), és steril körülmények között egy középvonalas laparotómiát végeztünk. Az infrarenalis aorta 1 cm-es szegmensét izoláltuk, és az összes ágyéki artériát ligáltuk. Az aorta külső átmérőjét az elasztáz infúzió (DA előinfúzió) előtt mértük digimatikus féknyereggel (Mitutoyo, Kanagawa, Japán). Polietilén katétert (Becton Dickinson, Sparks, MD) illesztettünk a jobb külső iliac artériába, és haladtunk az izolált aorta felé. A proximális aortába egy atraumatikus szorítót helyeztünk, és a próba rögzítéséhez ideiglenes ligálást végeztünk a distalis aorta felett. Az izolált aortát 2,7 egység sertés I típusú hasnyálmirigy-elasztázzal (E-1250, tétel 84K7700; Sigma, St. Louis, MO) 60 percig infúzióval injektáltuk (TOP-5200; TOP, Tokió, Japán). Az elasztáz infúziója után a ligatúrát és a próbát eltávolítottuk, a jobb külső csípőartériát lekötve. A retroperitoneumot és a hasfalat lezártuk. A patkányokat a beavatkozás után a 14. napon újra megvizsgáltuk (14 DPI), és megmértük a maximális DA-t.

Kezelési csoportok

Az elasztáz infúzióval rendelkező kísérleti patkányokat véletlenszerűen 5 csoportra osztottuk a kezelések szerint: egy csoportot kezelés nélkül (kezeletlen csoport, n = 10), egy csoportot, amelyet EBHG-vel kezeltünk desztillált vízzel (EBHG csoport, n = 10), 3 EBHG-vel rendelkező csoportok különböző beépített mennyiségű bFGF-rel (EBHG csoport + 100 ng, EBHG csoport + 1 μg és EBHG + 10 μg; n = 10, 6 és 6). Ezeket az EBHG-ket a patkányok elasztázzal infúziós aortáira helyeztük, és a retroperitoneumot lezártuk.

3 patkánycsoport szövettani értékelését végeztük, beleértve a kezeletlen csoportot, a csak EBHG-t tartalmazó csoportot és a 100 ng EBHG-értékkel rendelkező csoportot (n = 6, ill. 6). A patkányokat a beavatkozás után a 14. napon felöltük; 4% paraformaldehid-oldatot foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) 5 percig perfundáltunk a bal kamrán keresztül, és az eltávolított aortákat 2% -ig 4% paraformaldehid-oldattal PBS-ben rögzítettük, majd 100% etanolt adtunk hozzá. A mintákat paraffinba ágyazottuk, és 5 μm szövettani metszeteket kaptunk, amelyeket Verhoeff-van Gieson (VVG) festékkel festettünk elasztikus szálakra, és előállítottuk immunhisztokémiai vizsgálatukra. A festett rugalmas szálak/az átlagos terület arányát a VVG festésnél Image-J szoftverrel számoltuk (NIH, Bethesda, MD).

Az immunhisztokémiai vizsgálatot deparaffinizálás és rehidratálás után végeztük. A metszeteket 10 percig H202-vel kezeltük az endogén peroxidáz aktivitás blokkolására. Miután 1% szarvasmarha-szérumalbumint PBS-ben 30 percig blokkoltunk, a szövettani metszeteket egy primer antitesttel inkubáltuk egy éjszakán át 4 ° C-on, beleértve az egér monoklonális antitestjét az a-simaizomaktin (a-SMA) humán (Sigma) festésére. patkány CML és patkány bFGF elleni nyúlantitest (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Ezt követően az inkubálást biotinilezett szekunder antitesttel és avidin-biotin komplextel (Dako Cytomation, Glostrup, Dánia) végeztük a gyártó protokollja szerint. A szövettani metszeteket hematoxilinnel ellenfestettük. Negatív kontroll kísérleteket hajtottunk végre az elsődleges antitest helyettesítésével egy nem specifikus egér vagy nyúl immunglobulin G-vel. A mediál CML-sűrűséget az a-SMA pozitív sejtek átlagolásával határoztuk meg, 8 nagy teljesítményű mezőben, 2 szövettani metszet közül választva.