Krioelektron mikroszkópos minta előkészítése fókuszált ionnyalábos protokoll segítségével (lefordítva
Összegzés
A krioelektromos mikroszkópokat, akár pásztázó (SEM), akár transzmissziós (TEM), széles körben alkalmazzák biológiai minták vagy más, nagy víztartalmú anyagok jellemzésére 1. SEM/fókuszált ionnyalábot (FIB) használnak az érdekes tulajdonságok azonosítására mintákban, és vékony, átlátszó elektronfóliát extrahálunk a krio-TEM-be való átvitelhez.
Absztrakt
Bevezetés
Az FIB-t széles körben használják a TEM-minták előállítására számos előnye érdekében. 7. Hogy csak néhányat említsek: a nagy energiájú ionok használata közel normál előfordulással minimalizálja az anyaggal kapcsolatos differenciál őrlési sebesség hatását; az ömlesztett mintából vett terület mikronnál kisebb pontossággal választható; nagyon kis mennyiségű anyag kerül eltávolításra. Néhány legújabb technikai fejlődés lehetővé tette a FIB alkalmazását a TEM minták előállításához is 2,8-10 kriogén hőmérsékleten. Számos előnye van a hagyományos, főként lágyanyag-mintáknál alkalmazott 11, 12 kriomikrotómia-előkészítési módszerrel szemben, mint például a szeletelt lap mechanikai deformációjának hiánya, a késnyomok hiánya és az összetett minták elkészítésének lehetősége. kemény/puha interfészek vagy alkatrészek.
Jegyzőkönyv
Megjegyzés: A protokollban feltüntetett összes paraméter érvényes az itt feltüntetett műszerekre és modellekre. Ezen paraméterek egy része (a szövegben * -gal jelölve) eltérő lehet, ha másik gyártót vagy modellt használ.
1. A FIB/SEM megvalósítása
2. A minta lefagyasztása
3. Maróion
4. Cryo transzfer a TEM-be
Reprezentatív eredmények
Ebben a munkában a következőket alkalmazták: kettős gerenda FIB/SEM, nanomanipulátorral és kriogén kamrapreparátummal felszerelve; egy TEM krio-transzfer támogatással; krioprototípus-átadó állomás. A krio-előkészítő kamra anticontaminator (AC) pengéit és a nanomanipulátor (NM) hegyét Gatan módosította. A szokásos kriokamrához képest az AC csapok nagyobbak, hogy nagyobb hőelnyelőt biztosítsanak az NM csúcs számára. Ezenkívül a légkondicionáló fel van szerelve bilincsekkel a Cu fonatok összekapcsolására a hőcseréhez az NM csúccsal. A FIB/SEM gumiabroncsait úgy módosították, hogy lehetővé tegyék az NM-t abban, hogy bent legyen, még akkor is, ha a mintakamrát szellőztették. Meg kell jegyezni, hogy az ebben a munkában használt paraméterek a legmegfelelőbbek a fent említett berendezésekhez; Ezeknek a paramétereknek a beállításához szükség lehet más típusú berendezésekkel való munkavégzéshez. A protokoll használatához be kell tartani a kriogén anyagok, a nitrogén és a folyadék vákuumrendszerek kezelésének szokásos óvintézkedéseit.