Nem meghatározása a polimeráz láncreakció technikájával tevéknél

В
В

Testreszabott szolgáltatások

Magazin

SciELO Analytics
Google Tudós H5M5 ()

Cikk

Spanyol (pdf)
Cikk XML-ben
Cikk hivatkozások
Hogyan lehet idézni ezt a cikket
SciELO Analytics
Automatikus fordítás
Cikk küldése e-mailben

Mutatók

Idézi SciELO

Kapcsolódó linkek

Hasonló a SciELO-ban

Részvény

Journal of Veterinary Research of Peru

verzióВ nyomtatva ISSN 1609-9117

Tiszt. Investiga. állatorvos. Peru v.23В n.3В LimaВ 2012. augusztus

Polimeráz láncreakció alkalmazása a dél-amerikai tevefélék ivarzásához

Vanya Montenegro V. 1, Lenin Maturrano H. 1,2,3, Jane C. Wheeler 2, Raєl Rosadio A. 1,2

A vizsgálat célja egy olyan PCR-technika kidolgozása volt, amely meghatározta a dél-amerikai tevék (CSA) nemét, vér- és ürülékmintákból származó cink ujjfehérje (ZF) szekvenciák, valamint alpaka embriók sejtjeinek felhasználásával. Összesen 28 alpaka, láma és vicu ± a vérmintát, 20 vicu ± a és guanaco székletmintát, valamint 22 alpaka embriót alkalmaztunk 72 és 96 óra között a posztkopula után. A székletmintákat és az embriómintákat 96% -os, illetve 70% -os etanolban tartósítottuk. A vérből és a székletből DNS-t nyertek ki kereskedelmi készletekkel. Három módszert (forralás, proteináz K és fenol-kloroform) alkalmaztunk a DNS kivonására alpaka embriókból. A DNS elemzésére két PCR-technikát fejlesztettek ki: multiplexet (széklet- és vérminta-DNS-hez) és heminesztált PCR-t (embriósejt-DNS-hez). A multiplex PCR pontosan meghatározta a nemet a vérből kivont DNS-minták 100% -ában, a friss ürülékből kivont minták 87,5% -ában és a 4 éves székletminták 50% -ában. A hemesztelt PCR-t azonban nem sikerült optimalizálni.

Kulcsszavak: DNS, PCR, ivarzás, dél-amerikai teve

BEVEZETÉS

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

DNS-minták beszerzése

DNS kivonása a vérből

DNS-kivonás a székletből

DNS-kivonás embriókból

DNS mennyiségi meghatározása

Az összes mintából kivont DNS koncentrációját és tisztaságát spektrofotometriával határoztuk meg 260 és 280 nm-en. A DNS minőségét elektroforézissel igazoltuk agarózgélen.

Az optimalizálási folyamat a vér DNS-ben abból állt, hogy az emlősökben a nagymértékben konzervált ZF gén különböző méretű szegmenseit három primer felhasználásával amplifikálták (Aasen és Medrano, 1990). A protokollok a ZFX2 és ZFX4 primereket használták fel mindkét nemi kromoszómán (ZFX és ZFY) jelen lévő 250 bázispár (bp) szegmens felerősítésére, és egy harmadik fordított ZFY2-t, amelyet a ZFX2 primerrel együtt használtak, csak 130 bp szegmens amplifikálására az Y kromoszómán (ZFY) (Montenegro et al., 2007).

Az erősített töredékek felbontása

Mindegyik PCR termékét 2% -os agarózgélen elemeztük TBE 0,5X pufferoldatban (Tris, bórsav, EDTA), vízszintes elektroforézis kamrában és molekulatömeg-markerrel együtt, hogy meghatározzuk az amplifikált fragmensek méretének közelítő értékét. . A PCR termékeket etidium-bromiddal festettük, transzilluminátoron tettük láthatóvá és Polaroid kamerával fényképeztük (DS 34).