Természetes gyilkos sejtpopulációk és citotoxikus aktivitás tejjel etetett sertésekben

sejtpopulációk

  • Tárgyak
  • Összegzés
  • Háttér:
  • Mód:
  • Eredmények:
  • Következtetés:
  • Fő
  • Eredmények
  • NK sejtpopuláció mérete
  • Az Intelectin-2 mRNS expressziója PBMC-ből izolált NK sejtekben
  • NK-sejtek citotoxicitása
  • NK-sejtekhez kapcsolódó génexpresszió PBMC-ből izolált NK-sejtekben
  • Vita
  • Mód
  • Kémiai termékek
  • bLf
  • Diétás kezelések és állatprotokoll
  • Minta kollekció
  • PBMC izolálás
  • A lépsejtek és az MLN teljes izolálása
  • NK sejtek izolálása és fenotípusos azonosítása a tisztaság érdekében
  • NK sejt-citotoxicitási vizsgálat áramlási citometriával
  • A vér mononukleáris sejtjeinek, valamint az összes MLN sejt és a lép fenotípusos azonosítása
  • NK sejt gén expresszió
  • Statisztikai elemzés
  • Nyilatkozat a pénzügyi támogatásról
  • Kinyilatkoztatás
  • Kiegészítő információk
  • Powerpoint fájlok
  • Kiegészítő S1 ábra.

Tárgyak

  • NK sejtek
  • Táplálás
  • Gyermekgyógyászat

Összegzés

Háttér:

A természetes gyilkos (NK) sejtek a veleszületett immunvédelmi rendszer alkotórészei, szintjük különbözik a csecsemők és a tápszerrel táplált csecsemők (FF) között. A laktoferrin (Lf) ex vivo modulálja az NK-sejtek citotoxicitását. Feltételeztük, hogy a szarvasmarha Lf (bLf) étrendje növeli az NK sejtpopulációt és a citotoxicitást.

Mód:

A malacokat 21 napon keresztül kocákkal (SR), FF vagy 1 g/l táplált bLf (LF) nevelték. Az NK sejteket (CD3 - CD4 - CD8 +) a vérben (perifériás vér mononukleáris sejtek (PBMC)), a lépben és a mesenterialis nyirokcsomóban (MLN) áramlási citometriával határoztuk meg. A PBMC NK sejteket citotoxikus aktivitásra teszteltük a cél K562 sejtek ellen ex vivo táptalaj (nem stimulált), interleukin-2 vagy bLf jelenlétében. Az NK sejt mRNS expresszióját kvantitatív reverz transzkripciós PCR-rel határoztuk meg.

Eredmények:

Az SR és LF malacokban több NK-sejt volt az MLN-ben (P = 0,0097) és a lépben (P = 0,0980), mint az FF malacokban. PBMC-ben az SR malacok több NK-sejtet tartalmaztak, mint az FF malacok (P = 0,0072); Az LF malacok köztesek voltak, és nem különböztek az FF vagy SR malacoktól. Az NK sejt intellinin-2 mRNS expressziója 2,5-szer magasabb (P = 0,0095) volt LF-ben, mint SR vagy FF malacokban. Az SR malacokban található NK sejtek magasabb citotoxikus aktivitást mutattak (P

Az Intelectin-2 mRNS bősége nagyobb volt a 21 napos bLf-vel táplált malacok természetes gyilkos sejtjeiben (LF, n = 3), mint azoknál, akik kocákkal (SR, n = 7) vagy tápszerrel (FF, n = 6) állatok. Az intelektin-2 normalizált értékeit úgy számítottuk ki, hogy az átlagos célmennyiséget elosztottuk a referenciagén (peptidilprolil-izomeráz A) átlagos mennyiségével. A hajtáskülönbséget minden méréshez úgy számoltuk, hogy a normalizált célértékeket elosztottuk az FF sertések átlagos normalizált célértékével. Az adatokat a ráncok különbségének átlag ± SD-ként fejezzük ki az FF állatokhoz viszonyítva. * P ≤ 0,05. bLf, szarvasmarha-laktoferrin.

Teljes méretű kép

  • Töltse le a PowerPoint diát

NK sejtek citotoxicitása

SR állatokból származó PBMC-ből izolált, interleukin-2 (IL-2) vagy bLf-vel nem stimulált vagy stimulált NK-sejtek magasabb citotoxikus aktivitást mutattak (P

A 21 napos korban nevelkedett kocákból izolált természetes gyilkos (NK) sejtek citotoxicitása (SR; n = 11; fekete), táplált tápszerrel (FF; n = 14; fehér) és táplált bLf-vel (LF; n = 11 szürke malac). A perifériás vér mononukleáris sejtek (PBMC) NK sejtjeit vagy nem stimuláltuk (Unst), vagy stimuláltuk interleukin-2 (IL-2) (20 ng/ml) vagy Lf (25 μg/ml) alkalmazásával, és 48 órán át inkubáltuk DiOC 18 jelzéssel, K562 jelzéssel. célsejtek: a célsejt-arány 10: 1. Az inkubáció végén propidium-jodidot (PI) adtunk az elhalt sejtek jelölésére. A citotoxicitást elpusztított célsejtként (PI + DiOC 18 +) jelentik a teljes célsejt százalékában (DiOC 18 +). Az adatokat átlag ± SD-ként fejezzük ki. Proc generalizált lineáris modell (GLM) teljes modell, P † szignifikáns különbségeket jelez az étrendek között. bLf, szarvasmarha-laktoferrin.

Teljes méretű kép

  • Töltse le a PowerPoint diát

NK-sejtekhez kapcsolódó génexpresszió PBMC-ből izolált NK-sejtekben

Annak érdekében, hogy meghatározzuk azokat a lehetséges molekuláris mechanizmusokat, amelyek hozzájárulhatnak az FF és LF állatok NK-sejtjeinek citotoxikus aktivitásának csökkenéséhez, kvantitatív reverz transzkripciós PCR-t hajtottunk végre a CD3-CD4-CD8 sejtekből kivont RNS-en. + Stimulálatlan perifériás vér NK ( 3. ábra ) Az NK-sejtek effektormolekulája, a perforin mRNS bősége háromszor, illetve hatszor alacsonyabb volt az FF és az LF malacok NK sejtjeiben, mint az SR malacokban (P = 0,0038, 3a. Ábra ). Ezenkívül a 2. csoport NK-tagjának (NKG2D), az NK-sejteken található aktiváló receptornak, a gyilkos sejtek lektinszerű receptorának K alcsaládjának 1. receptoraként ismert aktiváló receptor expressziója 3 volt, Ötször alacsonyabb az FF állatok NK-sejtjeiben, mint az SR-állatokéban, míg az NKG2D receptor gén expressziója az LF állatok NK-sejtjeiben közepes volt, és nem különbözött szignifikánsan egyik csoporttól sem ( 3b. Ábra ).

Perforin ( nak nek ) és az NK 2. csoportba tartozó D (NKG2D) receptor ( ) Az mRNS bősége a 21. napon tenyésztett kocákból izolált természetes gyilkos sejtekben (SR, n = 7), tápszerrel (FF, n = 4-5) és bLf-vel táplált malacokban (LF, n = 3). A célgének normalizált értékeit úgy számítottuk ki, hogy a kívánt átlagos mennyiséget elosztottuk a referenciagén átlagos mennyiségével. A hajtáskülönbséget minden méréshez úgy számoltuk, hogy a normalizált célértékeket elosztottuk az FF sertések átlagos normalizált célértékével. Az adatokat átlag ± SD-ként fejezzük ki. A különböző szubindexek (*, †, ‡) szignifikáns különbségeket jeleznek P ≤ 0,05 esetén. bLf, szarvasmarha-laktoferrin.