Urbina borok blog élesztő osztályozási módszerek
2011. január 3, hétfő
Élesztő osztályozási módszerek
AZ ÉGET OSZTÁLYOZÁSÁBAN HASZNÁLT JELLEMZŐK
- A sejtek mikroszkópos megjelenése.
- Szexuális reprodukciós mód.
- Fiziológiai jellemzők (különösen táplálkozási).
- Biokémiai jellemzők.
- A genomok összehasonlítása DNS-DNS vagy DNS-RNS újraszociációval
Rendszertan: Osztályozási és azonosítási tanulmány.
Osztályozás: Az élőlények csoportosítása taxonokba (taxonokba) az ősi hasonlóságok vagy kapcsolatok, vagy mindkettő szerint.
Azonosítás: Ismeretlen és hasonló ismert törzs összehasonlítása.
Nómenklatúra: Az elfogadott taxonok neve.
MIKROSZKÓPOS SZEMPONT
Sejtméret.
Alak: A sejtek alakja a vegetatív szaporodás módját jelzi.
Szálképződés
Szexuális szaporodás Az aszkospórák és a teliospórák szerkezete és alakja
FIZIOLÓGIAI JELLEMZŐK
Bizonyos cukrok erjesztésének képessége (fermentációs teszt).
Aerob növekedés különféle vegyületekkel (asszimilációs tesztek), amelyek mindegyike egyedüli szén- vagy nitrogénforrás.
Arbutin hasadás.
TECHNOLÓGIAI JELLEMZŐK
A fermentációs képesség vizsgálata.
A taxonómiai vizsgálatok inkubációs hőmérséklete 25º C, bár egyes élesztőknél az optimális magasabb, másoknál alacsonyabb.
KELET-OSZTÁLYOZÁSI MÓDSZEREK
Módszer: A sporulációt az élesztők kedvező, glükózban gazdag táptalajban (előporzó közegben) történő tenyésztése okozza, amelyben 48 órán át 28 ° C-on maradnak. Ez idő után a glükózban szegény sporulációs táptalajba (sporifikációs közegbe) vetik a vegetatív szaporodás lehető legnagyobb mértékű csökkentése érdekében, és kiegészítik sporulációt kiváltó anyaggal, például acetáttal. Ebben az utolsó közegben 3-5 napig 25 ° C hőmérsékleten tartják őket. Ezen inkubációs periódus után friss készítményeket készítenek, majd mikroszkópos megfigyelést végeznek, figyelembe véve a spórák jelenlétét vagy hiányát, valamint méretüket. A megfigyelés megkönnyítése érdekében kétes esetekben spórafestést lehet végezni.
Negatív sporuláció esetén a tenyészeteket szobahőmérsékleten tartják, és hetente legalább 4-6 hétig vizsgálják.
A média összetétele:
Előtermékenyítő közeg
50 g glükóz
Élesztőkivonat 10 g
Tápanyag-húsleves (Difco) 30 g
Kálium-acetát
Agar 20 g
1000 ml víz
Sporifikációs közeg:
1 g glükóz
2,5 g élesztő kivonat
Tápanyag-húsleves (Difco)
9,8 g kálium-acetát
Agar 20 g
1000 ml víz
A csövezés előtt a közeget meg kell olvasztani, mivel agart tartalmaz.
A táptalaj sterilizálását autoklávban, egy atmoszférában végezzük 15 percig.
A fermentációs teljesítmény az etanol százalékos (V/V) mértéke, amelyet egy élesztő törzs képes előállítani.
Ezt a tesztet eredetileg Hayduck dolgozta ki, és Hericstoth és Osztrovsky írta le 1927-ben. Az alkoholos erjesztés során felszabaduló szén-dioxid súlycsökkenésen alapuló meghatározásán alapul a sztöchiometrikus egyenlet szerint:
C2H12 06 ——-———— 2 CO2 + 2 CH3-CH2OH
Módszer: Az erjesztési teljesítmény meghatározásához 12º Beaumé szőlőmustot készítünk koncentrált mustból, pH-értékét nátrium-hidroxiddal vagy sósavoldattal 5-re állítva.
Az így készített táptalajt 100 ml-es Erlenmeyer-lombikokba osztjuk. 50 ml tápoldatot teszünk mindegyikbe. Autoklávban 121 ° C-on 15 percig sterilizáljuk.
A vetés fiatal kultúrákból származó platina fogantyúval történik - a must elvetése után a lombikokat Müller-szelepekkel ellátott tömény kénsavval ellátott gumidugókkal zárják le. Ezek a szelepek lehetővé teszik a szén-dioxid kilépését és megakadályozzák a levegő bejutását.
A vetés után a lombikokat lemérjük és 25 ° C-on inkubáljuk. állandó súlyig.
A folyamat végén keletkező súlykülönbség a felszabaduló szén-dioxidot jelzi, amelyet megszorozva egy megállapított tényezővel, közvetlenül megkapja a képződött etanol százalékos értékét (V/V).
Faktorszámítás:
180 g glükóz fermentálásakor 88 g szén-dioxidot és 92 etanolt termelnek; ezért egy gramm CO2 megfelel 1,04 g etanolnak. Mivel az etanol sűrűsége 0,79, 1,04 g megfelel 1,3 ce térfogatnak, ezért 1 g CO2 megfelel 1,3 ce etanolnak.
A grammban kifejezett tömegkülönbség szorzata 1,3-mal megkapja az előállított etanol térfogatát.
Sörlétérfogat ————————— 1,3-szoros fogyás = g etanol
100 ———————————————— PF
A sör térfogata 50 ml volt. hamar:
PF = 100 x 1,3 x súlycsökkenés grammban: 50
P.F. = 2,6 x súlycsökkenés grammban.
A gyakorlatban ezt megszorozzák 2,5-vel, mivel a hozam nem 100.
Ennek a tesztnek az eredménye fontos információt nyújt a vizsgált törzs azonosságáról.
A taxonómusok nem veszik figyelembe ezt a tesztet, azonban az Ipari Fermentációs Intézetben megfigyelték, hogy ez a teszt gyorsan meghatározza a nemzetséget, és azon belül, egyes esetekben a Saccharomyces nemzetségnél lehetővé teszi a különféle fajok megkülönböztetését. Ennek a tesztnek a mellőzése annak a ténynek tudható be, hogy a szőlőmust nem elsősorban az élesztő vizsgálatának forrása, ahogy ez az Intézetben szinte annak eredetétől fogva megtörtént.
A PSEUDOMICELIÁRI ÁGAK ALAKULÁSA
Módszer: Abszorbens papírt helyezünk egy Petri-csészébe, és egy hajlított üvegrudat helyezünk a tetejére, amelyre csúszdát helyezünk. A készletet 120 ° C hőmérsékletű kemencében 3 órán át sterilizáljuk. Miután steril és aszeptikus körülmények között dolgozott, néhány csepp steril olvasztott maláta agart viszünk fel a tárgylemezre, hogy vékony filmet képezzünk. Amikor a táptalaj szilárd, egy fiatal tenyészetből (48 órán át malátagaron) vetjük platina huzallal, hosszanti csíkot és számos nagyon könnyű keresztirányú vonalat alkotva. Steril vizet öntünk a papírra a magas páratartalom fenntartása érdekében a lemez belsejében.