Zakin, Mario Manuel
A BUENOS EGYETEM AIRES A PONTOS ÉS TERMÉSZETES TUDOMÁNYOK KARA 110 n a vírus oogglementqimmigganancia vagy immunocmmatogggia g fixálásának egyikének vizsgálata Mario Mama re]. Zakin szakdolgozat összefoglalása 1963. év
UNIVERSIDAD DE-BUBNOS AIRES PONTOS ÉS TERMÉSZETTUDOMÁNYI KAR Applicggión dg gg t6c3 gaa de tljggión do cggnlcnonto 1nnnnorluo ggggggcig és immunochronatosgggy a vírus tanulmányozásához do la waste grcigg 196
A szakdolgozat támogatója: Dr. Osvaldo A.Peso
célja ÉES Y METONS te le 1) mguoreecemil e) Antigenoedricee A fertőzött állatok természetű szervei]. és kísérletileg a sertéspestis. A A le prinre-ben használt oktatóanyagok. A tapasztalatok egy része a kísérletileg megfertőzött enimelee és a pestis békemozi. ha az eoepechoea lábához tartozó enilalea szerint ezek az utolsó szervek különböző dd országból származnak. pont A második tanítási sorozat esetében a 25 és 30 kg súlyú sertéseket 2 1. iqyeotedos eubeutáneemente-vel fertőztük meg. a sertésláz-vírus LM13 17-es szuszpenziójának felhasználása: letöltési anyagként a Laboratoriosmi-nál. A fertőzést követő harmadik és nyolcadik nap között Enimlee-t feláldoztuk, és csókot gyűjtöttünk. ganglion és vese. b) szérumok és globalinaa A - Sertéspestis hyperinnme szérum. virulens defibrinnel történő oltással nyerhető olyan sertéseknél, amelyek már rendelkeznek valamilyen immunitással. aea oltással, .látni betegségenként. A szérumot a Fuerte Sancti Spiritu Laboratories-hoz juttattuk. // 9
B - Suoro do antiporoino nyúl, amelyet egymás utáni oltással nyernek. nachóval vagy vállral, normál sertésszérum adagokkal. A napi dózisok 0,1 és 0,2 1 között változtak, az oltások száma 16 volt, másfél éven át beadva. Az első oltás során Freund olajbogyóit alkalmazták, az adjuváns szerint 2: 1 arányban. A proepitin toxicitás módosításával kapott titerek 1/12800 és az egész érték között voltak. minden állat a következő volt: Inoo. nl m1 N 'nat. Freund vi t1 m90 do oltás 1. 1. 2 ac x) 2 0 1 '1P (x) 1 Banán 3 0. 1 o 1n (m) 2 és 4 O. 1 - o 2 nn 5 0,1-1p 3 nn 6 Q. 1 - m 2 nn 7 0,1 oo 2 a 8 0,15-1p 3 a 9 0. 15-13 2 nn 10 Oo15 - o 2 a 11 0,15 vagy 1p 3 nn 12 0,15-1! 2 n n 13 0,15 o o 2 n n 14 Oo2-1p 3 n n 15 0,2 c 1m 2 n n 16 0. 2 o e 2 u n (x) ao - euboutánnu (zz) 1p a intraporitonális (xxx) 1. - intranusoulor llo
szobahőmérsékleten, majd megfertőzzük a csapadék két rétegét. 11.- tisztítás a DEAEcellulóz oszlopon való áthaladással. a technikai ds Courtsin szerint (28). A DEAEcellulózt, miután megmostuk és pH-ját 6-ra állítottuk, 0,02 M pufferben (pH 6) (foszfátpuffer) szuszpendáltuk. míg a konjugált anyag. megtisztítani. egy éjszakán át dializáltuk ugyanazon kipufogódob ellen. Az érdeklődés tisztított frakciója. Ezt 0,02 MpH 6 pufferrel hígítottuk, míg a szennyeződéseket az oszlopból pH 5,2 pufferrel távolítottuk el, amelyet már korábban leírtunk. A folyadékot Carbowax 20 M-vel végzett dialízissel az eredeti térfogatra koncentráltuk. I. Normál sertésszérum. sertéspestis-mentes állományokból származó leohonokból nyerték. és be nem oltottak. o) Oldatok és reagensek A- CIN .oososaoso-szóda-koz-foszfát fiziológiai oldat. 801 8 P0HI. 0 0,00,0. - 2048 4 2 2 Desztillált víz, pl. PH 7-8 "811 B - 1000 ml oooooooooooooooooo ÜO3HNh puffer szénhidrogén-dioxid-dioxidhoz 0,000.000.00000000 Agus desztillált kupak. 400 m1 PH 9 G // 17
c - Puffer a konjugált cocoootneoe fehérje dialíziséhez 100.00.00.00003232 g eeeoeeeeeoeeeeeo 7,2 g Aguad'atilad. kapucni. o.u40 0,1 PH 7 D- Veronális puffer veronátrium-elektroforézishez. 7,33 g nátrium-acetát. 01H0,1N. 4,86 g 45ll desztillált víz oszp. 750m1 ph 8,6 E o A módosított Koch és Malbekin (1924) metodoeolorln trioo-ban használt reagensek: - Emésztési oldat: Az 5% -os réz-szulfát oldatot 100 ml tömény és tiszta kénsavval elegyítettük. A kapott oldatot óvatosan 100 ml desztillált vízbe öntjük. Ammónium-szulfát kontrolloldata: 9,4332 g tiszta monikaszulfátot és seoo-t oldunk 3043-ban! 0,2 N az 1000 m1 teljesítéséhez. A 80 32 0,2 N oldatot úgy kaptuk, hogy 5,6 1 tömény savat feloldottunk vízben, amíg 1000 ml-t nem kaptunk. Ez a tömény oldat 2 µl R/nl-t tartalmazott, és hígításra volt szükség ahhoz, hogy kontrollként használjuk. Víz 20 nl (40 mg N) tömény ammónium-szulfát-oldatban. Hozzáadunk 180 nl SO4H20,2N-t, és desztillált vízzel 1 literre töltjük. Ennek az oldatnak minden ml-je 0,04 Ig I. // 18 értéknek felel meg
- Neeeler-reagens: 22,5 g jódot feloldunk 20 nl 30-5 IK-ot tartalmazó anában. Miután az oldódás befejeződött, 30 g Hgmetallic-ot adtunk hozzá, és ez jól sikerült, elkerülve a forró keverést, és szamáráramban lehűtve. A keverést addig folytattuk, amíg maga a jód színe el nem tűnt. A felülúszó folyadékot dekantáltuk, és a reakciót keményítőoldattal szemben teszteltük. Amikor a reakció negatív. a reagensben higany jött ki. ezért hozzáadott néhány cseppet ugyanolyan korábbi koncentrációjú jódot. Jódot adunk addig, amíg enyhén pozitív reakciót nem kapunk a keményítővel szemben. Az oldatot vízzel hígítottuk, hogy 200 ml OHNeal lofil Buffere térfogatát kitöltsük, majd oszlopkromatográfiásan kettővel vagy 0,2 MpH 6,3 foszfátpufferrel kevertük: 387 ml 0,2MPOHN 4 2 (A) -ot megolvasztottunk 112,5 ml 0,2-204 HN32 oldattal. (B); Ily módon 0,2 M foszfát-pufferrel rendelkezünk, amelynek pH-ja 6,3. Enni. Az oldathoz 100 µl-t vettünk, és 1040 ml desztillált vizet adtunk hozzá. a foszfátpuffer 0,0175 MpH 6,3. - 0,02 MpH 6 foszfátpuffer: ha 877 nl (A) -ot kapunk, akkor összekeverjük 123 ml (B) -vel, így 0,2 H ph 6-os foszfátpuffert kapunk. 100 1 és 1000 liter hígítását desztillált vízzel kapjuk meg a puffert 0t02 l ph 6. // 19