A búza csökkentése az étrendben csökkenti a vizelet dezoxinivalenol szintjét az Egyesült Királyságban élő felnőtteknél

búza

  • Összegzés
  • Bevezetés
  • Mód
  • Dizájnt tanulni
  • Élelmiszernaplók
  • Vizelet DON extrakció
  • A kivont DON LC-MS elemzése
  • Kreatinin elemzés
  • Statisztikai elemzés
  • Eredmények
  • Vita
  • Szójegyzék

Összegzés

Mód

Dizájnt tanulni

A vizsgálatot 7 napos időtartamon keresztül végezték, és 25 önkéntes, 16 nő és 9 férfi vett részt 21 és 59 év között. Az 1. és a 2. napon ("normál étrend") közepesen nehéz étkezési naplókat tartottak, a 3. napon pedig üres vizeletmintát vettek az első reggeltől. A 3–6. Napon („csökkentett búzaintervenció”) arra kérték az önkénteseket, hogy korlátozzák a bevitelüket egy olyan búza listájára, amely valószínűleg búzát tartalmaz (kenyér, sütemények, tészta, reggeli müzlik stb.), És cseréljék ki egy a javasolt alternatívák listája (pl. rizs, burgonya). Az 5. és a 6. napon az étkezési naplókat ismét karbantartották, és a 7. nap első reggelén üres vizeletmintát nyertek. A vizsgálat előtt minden önkéntestől tájékozott beleegyezést kaptak, és az NHS Research etikai bizottságának etikai jóváhagyása Bradfordban, Egyesült Királyság. .

Élelmiszernaplók

Az élelmiszer-naplókat teljesen kódolták egy belső Microsoft Access-alapú étrend-elemző csomag használatával, az Egyesült Királyság élelmiszer-összetételének felhasználásával (Holland et al., 1992). A beavatkozásnak való megfelelés értékeléséhez összehasonlítottuk az egyes élelmiszercsoportok (kenyér, sütemények, reggeliző gabonafélék és tészta) fogyasztásának gyakoriságát a szokásos étrend (1. és 2. nap) során a beavatkozáséval (5. és 6. nap). Ezenkívül megbecsülték a fajlagos ételtömegeket, és meghatározták a búza alapú táplálékfelvételt minden egyén számára a fő búzaforrások (kenyér, reggeliző gabonafélék, tekercs, tészta, sütemények és sütik) alapján. Egyéb búzaforrások fordulnak elő az étrendben, például szószokban és sűrítőkben. A teljes búza bevitelhez való hozzájárulását azonban viszonylag csekély jelentőségűnek becsülték.

Vizelet DON extrakció

A teljes vizelet DON értékét Meky és mtsai módszerének módosításával mértük. (2003) és a 13 C-DON (Biopure Referenzsubstanzen, Tulln, Ausztria) használata IS-ként. Az IS olyan keverék volt, amely túlnyomórészt 13 C 15 -DON-ot (molekulatömeg (M r) 311; 81,4%), de 13 C 14-DON-t (M 310) is tartalmazott; 16,8%). Ennek a vegyületnek az IS-nek való alkalmasságát a közelmúltban a DON-nal szennyezett gabonafélék LC-MS/MS elemzésével igazolták (Haubl et al., 2006).

A vizeletvizsgálat során a mintákat centrifugáltuk (2000 g; 15 perc; 4 ° C) és IS-t adtunk 4 ml vizelethez, így 5 ng/ml végkoncentrációt kaptunk. Az egyes minták pH-ját 6,8-ra állítottuk, és 23 000 U β-glükuronidázt (Escherichia coli IX-A típusú; Sigma) adtunk hozzá 1 ml 75 mM KH2P04-ben és vízfürdőben inkubáltuk 18 órán át. Emésztés után a mintákat centrifugáltuk (2000 g; 15 perc; 4 ° C), és a felülúszót 16 ml-re hígítottuk PBS-sel (pH 7,2). A hígított anyagot átengedtük a DONtest ​​Immunoaffinity oszlopokon (IAC) (Vicam, Watertown, MA, USA), hogy kivonjuk a DON-ot a gyártó utasításainak megfelelően. A DON-ot az oszlopokról 4 ml metanollal eluáltuk, és az extraktumokat vákuumban szárítottuk Savant Speed ​​Vac alkalmazásával, és elemzés céljából 250 ul 10% (v/v) etanolban oldottuk fel. Az vizeletmintának két alikvot részét, ismert DON-szinttel, szintén az IS-hez adtuk, és mindegyik vizsgálati minta-tételgel elemeztük minőségellenőrzésként (QC).

A kivont DON LC-MS elemzése

A DON-t HPLC-vel (Waters 2795 Separation Module, Milford, MA, USA) elemeztük MS detektálással (Micromass Quattro Micro triple quadrupole tömegspektrométer, Manchester, Egyesült Királyság). A DON elválasztást egy Luna C18 oszlop (150 × 4,6 mm, 5 μm részecskeméret (Phenomonex, Macclesfield, Egyesült Királyság)) alkalmazásával érték el. A mobil fázist 20% metanollal indítottuk és izokratikusan 10 percig futtattuk. Egy mosási fázis 6 percig ). ezután perceken át 75% metanol alkalmazásával végeztük, majd 20% metanolt adtunk vissza a rendszer egyensúlyával ebben a koncentrációban további 11 percig. Az áramlási sebesség 1 ml/perc volt, és az injekció térfogata 25 ul volt. A HPLC oszlopból az eluenst az MS deszolvációs kamrájába irányítottuk, a maradékot pedig hulladékba juttattuk.