A Cadherin-17 hasznos diagnosztikai marker az emésztőrendszer adenokarcinómáihoz -

Összegzés
Fő
Anyagok és metódusok
Szövetminták
Szövetmátrixok
Western Blot elemzés
Immunhisztokémiai festés
Eredmények
Vita

Összegzés

Fő

Egy ismeretlen elsődleges hely rákja a hetedik-nyolcadik leggyakoribb rák, amelyet a klinikai gyakorlatban találtak. 1 A 100 000 lakosra jutó, életkorral korrigált éves előfordulási arány az Egyesült Államokban 7–12, Ausztráliában 18, Hollandiában pedig 6 eset. Ez a negyedik leggyakoribb oka a rákos halálnak mind a férfiak, mind a nők körében. 2 Mivel az optimális rákkezelés az elsődleges tumor helyéhez kapcsolódik, az elsődleges hely azonosításának hiánya jelentős problémákat okoz a betegek kezelése során. Az adenokarcinómák az összes ismeretlen elsődleges helyrák közel felét teszik ki. Az immunhisztokémia alkalmazása specifikus antigének kimutatására a tumorsejteken jelentős javulást eredményezett a rák diagnózisában. Például prosztata-specifikus antigént használnak markerként a prosztatarákra. 3 A pajzsmirigy transzkripciós faktor a tüdőrák markere. 4 A gasztrointesztinális (GI) daganatok esetében azonban még mindig nincs jó marker.

A kadherin-17, más néven máj-bél kadherin vagy humán peptid transzporter-1, a kadherin szupercsalád tagja és Ca2 + -függő sejt-sejt adhéziós molekula. 5., 6. Az úgynevezett klasszikus kadherinektől, például az E, N és P kadherinektől eltérően, a kadherin-17-nek hét kadherinismétlése van az öt helyett az extracelluláris doménben, és csak 20 aminosavmaradék van a citoplazmatikus doménben. A markánsan rövid citoplazmatikus domén nem rendelkezik homológiával a többi kadherinnel, és a kadherin-17 adhéziós funkciója nem függ más citoplazmatikus fehérjékkel való asszociációtól. 7 A kadherin-17 szubcelluláris eloszlása szintén eltér a klasszikus kadherinektől. A bélhámsejtekben az E-kadherin a tapadó csomópontokban koncentrálódik, míg a kadherin-17 egyenletesen oszlik el az oldalsó érintkezési területen. 8.

A kadherin-17 szöveti megoszlása fajonként eltér. Patkányban a kadherin-17 a máj és a bél hámsejtjeiben expresszálódik. Emberekben és egerekben az expresszió csak a bél hámsejtjeire korlátozódik, és a májban nem található meg. A 17-cadherin korlátozott eloszlása a normál szövetekben arra utal, hogy ez hasznos marker lehet a primer tumorhelyek azonosításához. Beszámoltak arról, hogy a kadherin-17 kolorektális, 10 gyomor-, 11, 12 és hasnyálmirigyrákban expresszálódik. 13 Nem ismert, hogy más szervek daganataiban fejeződik-e ki.

Következésképpen ebben a tanulmányban szövetmátrixok segítségével megvizsgáltuk a kadherin-17 expresszióját a test különböző helyeiből származó daganatokban. Megállapítottuk, hogy a cadherin-17 diffúzan és erőteljesen expresszálódott kolorektális adenokarcinómákban, szétszórtan expresszálódott a gyomor, a hasnyálmirigy és az epevezeték adenokarcinómáiban, és gyakorlatilag nem expresszálódott a test más részein található tumorokban. Vizsgálatunk azt jelzi, hogy a cadherin-17 hasznos marker lehet a metasztatikus adenokarcinómák elsődleges helyeinek azonosításához.

Anyagok és metódusok

Szövetminták

A tajvani Egyetem Nemzeti Kórháza Patológiai Tanszékének archívumából 518 korábban jellemzett primer karcinómából és 60 nem tumoros szövetből nyertek formalinnal fixált, paraffinba ágyazott szövetblokkokat. A tanulmány az intézményi felülvizsgálati testület irányelveinek megfelelően készült. Ezek a daganatos esetek 44 emlőrákot, 39 méhnyakrákot, 33 kolangiokarcinómát, 47 vastagbélrákot, 57 májsejtes karcinómát, 50 tüdőrákot, 47 vesesejtes karcinómát, 89 petefészekrákot, 28 hasnyálmirigyrákot, 39 veserákot, prosztata- és 45 gyomorrákot tartalmaztak. rákos megbetegedések A nem tumoros szövetek spektrumát az 1. táblázat tartalmazza.

Teljes méretű asztal

Szövetmátrixok

A megcélzott szöveti területeket megjelöltük a H és E festett metszeteken, minden esetben 2 mm-es szövetmagot távolítottunk el kézi szövetmátrix eszközzel (Beecher Instruments, Silver Spring, MD, USA), és egy receptor paraffin blokkba illesztettük. Az egyesített szöveteket 4 μm vastag szeletekre vágtuk, és pozitív töltésű tárgylemezekre helyeztük.

Western Blot elemzés

Western-blotokat végeztünk 11 reprezentatív normál- és daganatszövet fehérjebiztosító lizátumain, beleértve a vese, a máj, a vastagbél, a vékonybél, a gyomor, a lép, a pajzsmirigy, a hasnyálmirigy, a placenta, valamint a petefészek- és tüdőrákokat. Az egyes lizátumok hasonló mennyiségű összes fehérjét Tris-glicin-SDS-8% poliszkrilamid gélekkel (Novex, San Diego, Kalifornia, USA) elválasztottuk, majd Millipore-val átültettük az Impobilon-P polivinilidén-difluorid membránokra. A membránokat 1 egér monoklonális anti-cadherin-17 antitesttel, 1H3 (IgG1) klónnal vizsgáltuk 1 μg/ml koncentrációban (Abnova, Taipei, Tajvan), majd peroxidázzal konjugált kecske anti-egér immunglobulinnal (1: 2500). ). A Western blotokat kemilumineszcencia alkalmazásával fejlesztettük ki (Pierce, Rockford, IL, USA).

Immunhisztokémiai festés

A szövetszakaszokat paraffinmentesítettük és rehidratáltuk. Az antigén visszanyerését úgy végezzük, hogy a tárgylemezeket 0,01 M citromsav-pufferben (pH 6,0) 100 ° C-on 10 percig inkubáljuk. 3% H2O2 és 5% marhahús magzati szérummal történő blokkolás után a tárgylemezeket monoklonális antitesttel reagáltuk a cadherin-17 (1H3 klón, Abnova), a citokeratin 7 (DakoCytomation, Glostrup, Dánia), a citokeratin 20 (DakoCytomation) vagy a CDX ellen. -2 (Biogenix, San Ramon, Kalifornia, USA), 1: 100 hígítás mellett, 4 ° C-on, egy éjszakán át. A tárgylemezeket polimer-HRP reagenssel (BioGenex) inkubáltuk. A peroxidáz aktivitást diaminobenzidin-tetrahidroxi-klorid (BioGenex) oldatával tettük láthatóvá. A metszeteket hematoxilinnel ellenfestettük. A sötétbarna hártyás festést pozitívnak, és egyetlen festést sem határoztuk meg negatívnak. Negatív kontrollok céljából az elsődleges antitestet 5% szarvasmarha-magzat szérummal helyettesítettük. A festést a következőképpen értékeltük: 0 (nem volt kimutatható festés); 1+ (75%). Pozitívan festő sejtekben a festés intenzív és egyenletes volt, ezért az intenzitást nem vettük figyelembe a pontszámban.