SINDY NATHALY NICOLA BENAVIDES - PDF ingyenes letöltés
AZ EMBER PAPILLOMA HPV VÍRUS TÍPUSOSÍTÁSA ÉS KAPCSOLATA A NÉPSÉGI JELLEMZŐKKEL ÉS SÉRÜLÉSEKKEL A Méhnyak rákjaiban NŐKBEN
AZ EMBERI PAPILLOMA HPV VÍRUS TÍPUSOSÍTÁSA ÉS KAPCSOLATA A NÉPI JELLEMZŐKKEL ÉS SÉRÜLÉSEKKEL A NŐKBEN A PASTO SINDY NATHALY NATHALY BENAVIDES BENAVIDES BAVERES BAVÁR BERÁSZÍTÓ BIOLÓGIAI DOKUMENTUM BAJÓZSOROS BAJNOKNAK BÉL SZAKÉRTELEMBŐL. MSc Tudományok Mikrobiológia NARIÑO EGYETEM PONTOS ÉS TERMÉSZETTUDOMÁNYI KAR BIOLÓGIA TANSZÉK SAN JUAN DE PASTO 2014 2
A diplomamunkában szereplő ötletek és következtetések a szerző kizárólagos felelőssége. A Nariño Egyetem Tisztelt Felsõ Irányelv Tanácsa által kiadott, 1966. október 11-i 1. sz. 324. cikk. 3
Milena Guerrero Flórez igazgató, Dolly Margot Revelo Romo Jurado Edith Mariela Burbano Rosero Jurado San Juan de Pasto, 2014. május. 4
Kollégáimnak Juan Pablo, Vanessa, Diana, Nixon, Carlos, Carolina, Mario, Juan Gustavo, Marcela, Christian társaságukért. Nagyon köszönöm mindannyiuknak. 6.
DEDIKÁCIÓ Önnek, Istenem, amiért erőt, energiát és szeretetet adott nekem a vizsgálat befejezéséhez. Szüleimnek José Nicola és Cecilia Benavides, Ricardo, Diana, David és Mauricio testvéreimnek, akik mindig támogattak és hittek bennem, megadva szeretetüket és megértésüket. Kollégáimnak minden segítségükért, támogató szavukért, tanácsukért és jó energiájukért. 7
TARTALOMJEGYZÉK BEVEZETÉS. 23 1. CÉLOK. 26 1.1 ÁLTALÁNOS CÉL. 26 1.2 KONKRÉT CÉLOK. 26 2. A MŰVÉSZET ÁLLAMA. 27 2.1 EMBERI PAPILLOMA VÍRUS - HPV. 27 2.1.1 HPV típusok és osztályozás. 27 2.1.2 A HPV genomja és szerkezete. 29 2.1.3 A HPV genom régióinak leírása. 30 2.1.4 Az L1 és L2 késői expresszió régiója. 31 2.1.5 Az emberi papilloma vírus változatai. 32 2.2 HPV és méhnyakrák. 33 2.3 A CCU természettörténete. 36 2.4 A HPV kimutatása és molekuláris tipizálása. 38 2.5 Kockázati tényezők a CCU-ban. 41 2.5.1 A szexuális partnerek száma. 41 2.5.2 A nemi kapcsolat megindításának kora. 2.5.3 Orális fogamzásgátlók alkalmazása. 42 2.5.4 Fertőzés más organizmusokkal. 42 2.5.5 Dohányzás. 43 8
2.5.6 Terhességek száma. 43 2,5 7 Hagyományos citológia. 44 3. MÓDSZERTAN. 46 3.1 A vizsgált populáció leírása. 46 3.1.1 Etikai megfontolások. 47 3.1.2. Felvételi kritériumok. 47 3.1.3 Kizárási kritériumok. 47 3.1.4 A vizsgálatban figyelembe vett populációs változók. 47 3.1.5 A minta mérete. 47 3.2 Információk nyilvántartása, minták felvétele, szállítás és megőrzés. 47 3.2.1 Népességi nyilvántartás. 47 3.2.2 Egyváltozós elemzés. 48 3.2.3 Minták felvétele. 48 3.3 Minták feldolgozása a HPV molekuláris tipizálásához. 48 3.4 A minták minőségelemzése β-globin PCR-rel. 49 Minták előkészítése a minőségelemzéshez. 49 3.4.1 A minta minőségének értékelése PCR/HHB amplifikációval. 49 3.4.2 A PCR/HHB termékek ellenőrzése agarózgél-elektroforézissel. 51 3.4.3 A PCR/HHB eredmények értelmezése. 51 3.5 HPV kimutatása és molekuláris tipizálása. 51 3.5.1 Gépelés fordított vonallal. 52 3.5.2 PCR-L1 GP5 +/GP6 + és DNS szekvenálás. 56 9
4.3.1 Citológiai (-), ASCUS és HPV fertőzésben szenvedő nők populációs jellemzői. 87 4.3.1.1 Szociodemográfiai jellemzők és HPV-fertőzés. 87 4.3.1.1.1 Kor és HPV fertőzés. 88 4.3.1.1.2. A szexuális partnerek száma és a HPV-fertőzés. 89 4.3.1.2 Gyneco-szülészeti jellemzők és HPV-fertőzés. 91 4.3.1.2.1 Tervezési módszer és HPV-fertőzés. 92 4.3.1.2.2 Egyéb organizmusok és HPV-fertőzés. 93 4.3.1.3 Gyulladással és HPV fertőzéssel járó reaktív sejtváltozások. 93 4.3.2 LIEBG, LIEAG, CCU elváltozásokban és HPV fertőzésben szenvedő nők elemzése. 94 4.3.2.1. LIEBG, LIEAG, CCU és HPV fertőzésben szenvedő nők életkora. 94 4.3.2.2 LIEBG, LIEAG, CCU elváltozások és HPV fertőzés. 96 4.3.2.3 LIEBG, LIEAG, CCU elváltozások és HPV típusok. 100 KÖVETKEZTETÉSEK. 102 AJÁNLÁSOK. 104 BIBLIOGRÁFIA. 105 MELLÉKLETEK. 127 11
23. táblázat: A HPV-fertőzés gyakorisága a LIEBG, LIEAG és CCU nők életkorának megfelelően. 95 24. táblázat: A HPV fertőzés gyakorisága LIEBG, LIEAG és CCU nőknél. 97 25. táblázat: A LIEBG, LIEAG és CCU nőknél talált HPV típusok gyakorisága. 100 13
Az ábrák felsorolása 1. ábra: Az LCR HPV 16 szekvenciák filogenetikai fája 28 2. ábra: A humán papilloma vírus genomja. 29 3. ábra A nyaki HPV onkogenezisének természettörténete. 36 4. ábra A méhnyakrák szövettani fejlődése. 38 5. ábra: Squamous cell atypia (ASC-US). 45 6. ábra Pasto község térképe, ahol a minták felvételi helyei találhatók. 46 7. ábra: PCO3 és PCO4 primerek gyűrűzése az emberi β-globin génben, 13 nta pozíció 123 ntg-nél. 8. ábra: A GP5 + és GP6 + láncindítók gyűrűző helyének ábrázolása a HPV 18 genomban, 6600 nta - 6744 ntg. 52 9. ábra A β-globin gén amplifikációja a nyaki fogmosás mintáiban. 73 10. ábra A β-globin gén amplifikációja biopsziás mintákban. 74 11. ábra. Mg ++ optimalizálási vizsgálat. 77 12. ábra: A HPV L1 gén amplifikációja. 77 13. ábra: Az UDN 217 mintában azonosított szekvencia összehangolása Blastn és MegaBlast által az NCBI-től. 80 14
MELLÉKLETEK FELSOROLÁSA A. melléklet. Tájékoztatott beleegyező űrlap. 127 B. melléklet. A rák megelőzésének klinikai kórtörténete. 132 C. melléklet. Citológiai eredményformátum. 133 D. melléklet. Mg ++ optimalizálási teszt PCR/L1 GP5 +/GP6 + esetén. 133 E. melléklet. Negatív fordított vonal-blot eredmények. 135 F. melléklet. A nyaki fogmosás és a biopsziás minták szekvenciájának összehangolása. 136 15
prb: Retinoblastoma Protein RCS: angol rövidítésből [The Rapid Capture System] mRNS: Messenger Ribonukleinsav RLB: angol rövidítésből [Reverse Line Blot] HSV: Herpes Simplex vírus HSV-2: Herpes Simplex vírus 2-es típusú HIV: Humán immunhiányos vírus HPV: Humán papillóma vírus HPV-RA: Humán papillóma vírus magas kockázatú HPV-BR: Humán papillóma vírus alacsony kockázatú 17
CIN II: Magas fokú laphám intraepithelialis elváltozásnak számít. A nyaki hám bazális kétharmadára korlátozódik. CIN III: Az ilyen típusú, szintén magas fokúnak tekintett sérüléseknél a dysplasia súlyos, és a nyaki hám több mint kétharmadát lefedi. Bizonyos esetekben a nyaki bélés teljes vastagságát is beleértve. PCR-L1: Polimeráz láncreakció, amely lehetővé teszi a HPV L1 gén körülbelül 150 bp-os fragmensének amplifikálását GP5 +/GP6 + primerek alkalmazásával. MEGELŐZÉS: Ez egy betegség vagy esemény előfordulásának száma a populációban és egy adott időpontban. REVERSE LINE BLOT: Ez egy fordított hibridizáción alapuló vizsgálat, amely lehetővé teszi 37 HPV genotípus azonosítását miniblotter rendszer és hibridizációs membrán segítségével, miután a mintákat GP5 +/GP6 + PCR-rel amplifikálták. HPV-RA: Magas onkogén kockázatú humán papillomavírus, amely invazív ano-genitális karcinómák kialakulásához kapcsolódik. BR-HPV: Alacsony onkogén kockázattal járó humán papillomavírus, jóindulatú elváltozások-szemölcsök és condylomák kapcsán. húsz