A vér fenilalaninjának monitorozása az étrend betartása szempontjából a

szempontjából

  • Összegzés
  • Fő
  • ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
  • A vizsgálat résztvevői
  • Vérminták
  • Plazma-aminosav-analízis AAA-val
  • A szárított vérfoltok aminosav-analízise HPLC-vel, fluorometrikus detektálással
  • Az MS/MS tandemszárított vérfoltok aminosav-analízise
  • Étrendi értékelés
  • statisztikai elemzés
  • EREDMÉNYEK
  • VITA

Összegzés

Cél: A fenilalanin monitorozása kritikus fontosságú a fenilketonuria kezelésében. A vér fenilalanin-koncentrációjának mérésére három módszert hasonlítottunk össze: az aminosav-analizátort, a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát fluorometrikus detektálással és a tandem tömegspektrometriát.

Módszerek: 22 fenilketonuriás, 12–48 éves korú beteget vizsgáltunk, akik részt vettek anyagcseretáborunkban. A vért heparinizált csövekbe vettük (aminosav-elemző elemzés céljából) vagy szűrőpapírba (nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás analízishez fluorometrikus detektálással és tandem tömegspektrometriával).

Eredmények: Az aminosav-analizátorral mért plazmában a fenilalanin plazmakoncentrációja szignifikánsan magasabb volt, mint a teljes vérből szűrőpapíron nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (különbség: 102 μM; 95% konfidenciaintervallum: 23, 181) és tandem tömeg mellett. spektrometria (különbség: 137 μM; 95% konfidencia intervallum: 58, 216). A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás és tandem tömegspektrometriás fenilalanin-koncentrációk nem különböztek szignifikánsan (P = 0,5).

Következtetések: A vér fenilalanin-koncentrációjának étrendi megfelelés ellenőrzése során a klinikusoknak figyelembe kell venniük az alkalmazott módszert; A szűrőpapír teljes vérvizsgálata következetesen körülbelül 15% -kal alacsonyabb volt, mint a plazmateszteké.

Fő

A fenilketonuria (PKU) egy veleszületett anyagcsere-hiba, amely egy recesszív genetikai mutáció eredményeként jön létre, általában abban a génben, amely a fenilalanin-hidroxilázt (a fenilalanin (Phe) aminosav (Phe) tirozinná (Tyr) hidroxilálásáért felelős enzim) kódolja. intermedier a neurotranszmitterek termelésében. Ha a PKU-t nem kezelik, a Phe metabolitok felhalmozódnak és a neurotranszmitterek csökkennek, ami mentális retardációhoz, viselkedési rendellenességekhez és rohamokhoz vezet. Ezek a negatív hatások azonban sikeresen megelőzhetők az étrendi kezeléssel, ha az élet első napjaiban kezdődnek, ezért minden állam ma már tartalmazza a PKU-t újszülött szűrőpaneljeiben.

Bár nincsenek univerzális irányelvek, a PKU kezelésének általánosan elfogadott megközelítése szigorú étrend, amely magában foglalja a vér Phe-koncentrációjának a kezelési tartományban tartásához szükséges intakt fehérje mennyiségét és Phe-mentes anyagcsere-képlettel történő kiegészítést. hogy a vér Phe-koncentrációja legalább 6 évig ne haladja meg a 360 μM-t (6 mg/dL; az μM-et mg/dL-re konvertálja, osztva 60-mal). 1 A Phe alacsonyabb koncentrációja társult a normál kognitív képességekkel serdülőknél és felnőtteknél, ami azt jelzi, hogy optimális eredmények érhetők el, ha a Phe-szintet 12-3 évig 120-360 μM-en és onnantól kezdve 120-900 μM-ig tartják. 2 A vér Phe-koncentrációjának szigorú ellenőrzése szintén kritikus a terhesség alatt; egy olyan anyától született gyermek, amelynek PKU-ja nincs metabolikus kontroll alatt, mentális retardációban, mikrokefáliában és veleszületett szívelégtelenségben szenvedhet. 3

Az egész életen át tartó étrend-megfelelés célja a vér Phe-koncentrációjának monitorozásához szükséges egyszerű, gyors és pontos módszerek kritikus igénye. Az újszülöttek PKU-jának egyszerű szűrési módszere, a Guthrie Bacterial Inhibition Assay, 4 már több mint négy évtizede használatos. Azóta számos új módszert fejlesztettek ki, köztük az aminosav-analizátort (AAA), a fluorometriát, az 5 nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát (HPLC), a 6, 7-et és a tandem tömegspektrometriát (MS/MS). 8, 9 Ezek az új technikák létfontosságúnak bizonyultak az újszülöttek szűrésének pontosságának és sebességének javításában, 10, 11, de kevés tanulmány vizsgálta ezen módszerek érvényességét a koncentrációk kvantitatív elemzéséhez. szükséges a beteg megfigyeléséhez.

A PKU-betegek különböznek az aktív enzim mennyiségétől, az orvosi ételek ízpreferenciájától és az előírt étrend betartásának hajlandóságától. Mindezek a tényezők a kezelést nagyon egyénivé és a monitorozás kritikussá teszik. Az Emory Egyetem Orvosi Genetikai Osztályán rendszeresen látjuk a PKU-s betegeket az anyagcsere klinikákon és az éves nyári táborban, ahol az AAA vért vesz és tesztel. Ezen látogatások között a betegek házi szúrásokat végeznek, vérüket szűrőpapírra foltozzák, és a mintát klinikánkba küldik, ahol azt HPLC-vel vagy újabban MS/MS-rel elemzik. Mivel ugyanaz a beteg valószínűleg AAA és HPLC vagy MS/MS, vagy esetleg mind a laboratóriumainkban jelenleg alkalmazott mindhárom módszer alkalmazásával vizsgálja a vérét, ezért arra voltunk kíváncsiak, hogy összehasonlítsuk az e három módszerrel kapott vér Phe koncentrációkat. Ezért az volt a célunk, hogy elemezzük, hogy a három módszer (plazma AAA és HPLC, valamint szűrőpapír teljes vérfoltok MS/MS) hogyan hasonlít össze a vér Phe koncentrációival.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

A vizsgálat résztvevői

Az Emory Egyetemen működő lányok anyagcseretáborát 1994-ben hozták létre azon serdülők igényeinek kielégítésére, akiknek meg kell birkózniuk a korlátozó étrend fenntartásával és a vérben a Phe kívánatos koncentrációjával. 12 serdülő lányt támadtak meg először, mivel utódaik gyenge metabolikus kontrollja káros hatásokat okozhat; A legújabb táboraink kibővültek, különféle korú nők bevonásával. A táborlakók egy hetet töltenek az egyetemen egy házban, metabolikus kutatók és táplálkozási szakemberek mellett, akik "tábori tanácsadóként" szolgálnak. A tábori tevékenységek magukban foglalják a PKU és az étrendoktatást, a főzőtanfolyamokat, az orvosi ételek elkészítését, az új kiegészítő mintákat és a szociális kirándulásokat. Ehhez az elemzéshez adatokat szereztünk egy 2004-es egyhetes tábor résztvevőitől: 25 lány és nő 12 és 48 év között.