Hogyan működik az Ion Exchange kromatográfia; News-Medical
Figyelem: Ez az oldal az oldal eredeti fordítása angolul. Ne feledje, hogy mivel a fordításokat géppel generálják, ne azt, hogy minden fordítás tökéletes lesz. Ezt a weboldalt és oldalait angol nyelven kívánják olvasni. Ennek a weboldalnak és weboldalainak bármilyen fordítása részben vagy egészben pontatlan és pontatlan lehet. Ez a fordítás kényelmi szolgáltatásként szolgál.
Az ioncserélő kromatográfia (IEX) egy olyan technika, amelyet általában használnak a biomolekulák tisztításához. Ez magában foglalja a molekulák szétválasztását a töltésük alapján.
Ez a technika kihasználja a kölcsönös hatást a mintában lévő töltött molekulák és a kromatográfiás mátrix papírfázisában lévő ellentétesen töltött részek között. Ez a fajta elválasztás más technikákkal nehéz, mivel a terhelést az alkalmazott puffer pH-ja könnyen befolyásolja.
Kétféle ioncsere-elválasztás lehetséges - kationcsere és anioncsere. Az anioncserében az állófázis - míg a kationcserében negatív - pozitív töltésű.
Az ioncserélő kromatográfia elve
Az IEX-kromatográfiát használjuk a töltött biomolekulák elválasztására. A töltött molekulákat tartalmazó nyers mintát folyékony fázisként használják. A kromatográfiás oszlopon áthaladva a molekulák az állófázisban ellentétesen töltött helyekhez kötődnek.
Az elválasztott molekulákat töltésük alapján változó ionerősségű oldattal öblítik ki. Egy ilyen oldatot áthaladva az oszlopon, a molekulák szelektív elválasztása történik különféle töltésük szerint.
A technika
Az ioncserélő kromatográfia legfontosabb lépéseit az alábbiakban soroljuk fel:
- A fehérje nem tiszta mintáját meghatározott pH-n töltjük az ioncserélő kromatográfiás oszlopra.
- A töltött fehérjék a gyantán töltött ellentétes funkcionális csoportokhoz kötődnek
- Sógradiens alkalmazható az elválasztott fehérjék öblítésére. Alacsony sótartalom esetén a kevés töltésű csoportot tartalmazó fehérjéket öblítik ki, nagyobb sókoncentrációk esetén a több töltésű csoportot tartalmazó fehérjéket öblítik ki.
- Az oszlop mosásával eltávolítják a nem kívánt fehérjéket és szennyeződéseket.
PH-gradiens alkalmazható az egyes fehérjék öblítésére is izoelektromos pontjuk (pl) alapján, amely ponton a fehérje aminosavai semleges töltést hordoznak, és ezért nem vándorolnak elektromos mezőben. Mivel az aminosavak a zwitter ionos összetételei, pozitív és negatív töltésű csoportokat tartalmaznak. A környezet pH-ja szerint a fehérjék pozitív, negatív vagy semmilyen töltést nem hordoznak. Izoelektromos pontjukon nem lépnek kölcsönhatásba az oszlopgyanta töltött feleivel, ezért nem öblítik ki őket. Csökkenő pH-gradiens használható a fehérjék öblítésére anioncserélő gyanta felhasználásával, és növekvő pH-gradiens használható a fehérjék öblítésére kationcserélő gyantákból. Ennek oka, hogy a mozgatható fázis puffer-pH-értékének növelésével a fehérje kevésbé protonálódik (kevésbé pozitív töltésű), így nem képezhet ionos kölcsönhatást egy negatív töltésű gyantával, lehetővé téve az eluálását. Ezzel szemben a mozgatható fázis pH-értékének csökkentésével a molekula protonálódik (kevésbé negatív töltésű, lehetővé téve az eluálását).